HMGB1-A box基因的原核表達(dá)及其對(duì)肝損傷的保護(hù)作用.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、本文研究了HMGB1-A box基因的原核表達(dá)及其對(duì)肝損傷的保護(hù)作用。文章通過(guò)巢式RT-PCR方法從RAW264.7細(xì)胞中擴(kuò)增出HMGB1A-box編碼基因，克隆于載體pMD-19T中，測(cè)序分析后亞克隆于pET-26b(+)表達(dá)載體中，構(gòu)建HMGB1A-box的原核表達(dá)載體；測(cè)序證實(shí)序列正確后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21，IPTG誘導(dǎo)4h，高效表達(dá)融合蛋白His-HMG1A-box；用重組HMGB1A-box和HMGB1或LPS一起刺激小鼠巨噬

2、樣細(xì)胞RAW264.7，12h后用ELISA方法測(cè)定上清液中TNF-α含量；用HMGB1A-box對(duì)其進(jìn)行治療，在各時(shí)間點(diǎn)觀察肝組織病理變化、HMGB1水平及血清ALT、LPS和TNF-α水平。研究表明：1.應(yīng)用基因工程手段成功構(gòu)建了HMGB1A-box原核表達(dá)載體，并在人腸桿菌DE3中獲得了高效表達(dá)。重組蛋白經(jīng)過(guò)Ni2+-NTA親和層析柱使純度達(dá)到80％以上，獲得的重組蛋白具有生物學(xué)活性；2.HMGB1A-box對(duì)急性肝損傷有保護(hù)作用

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