補腎疏肝方對更年期綜合征雌鼠生殖內(nèi)分泌及下丘腦垂體ERαmRNA表達的影響及其機理研究.pdf

1、目的： 探討更年期綜合征的基本病機，從生殖內(nèi)分泌、下丘腦及垂體雌激素受體αmRNA的表達等基因水平初步闡明中藥補腎疏肝方治療更年期綜合征的作用及其機制，初步揭示更年期綜合征“腎虛肝郁”病機理論的科學(xué)內(nèi)涵。 方法： ①本實驗采用12周齡雌性未孕Wistar大鼠60只，體重250g±10g，隨機取12只作為正常對照組，其余48只均采取雙側(cè)卵巢切除手術(shù)加夾尾激怒法造模，造模成功后隨機分為模型組、乙烯雌酚組、更年康組、補

2、腎疏肝方組，每組12只．造模結(jié)束后連續(xù)灌胃4周。末次灌胃禁食24小時后進行指標(biāo)檢測。 ②放免法檢測血清雌二醇(E2)、睪酮(T)、卵泡刺激素(FSH)含量。 ③放免法檢測血漿血栓素B2(TXB2)、6-酮-前列素F1α(6-keto-PGF1α)含量，并計算TXB2/6-keto-PGF1α比值。 ④電子天平稱取各組大鼠腎上腺、子宮的濕重，將臟器濕重換算成每100g體重mg數(shù)，即臟器重量系數(shù)。光學(xué)顯微鏡觀察各組大

3、鼠子宮、腎上腺組織形態(tài)學(xué)的變化及電子顯微鏡觀察各組大鼠子宮細胞超微結(jié)構(gòu)的變化。 ⑤TUNEL方法檢測各組大鼠子宮內(nèi)膜細胞凋亡率和子宮肌層細胞凋亡率變化。⑥逆轉(zhuǎn)錄一聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)檢測各組大鼠下丘腦、垂體組織雌激素受體α(ER α)的mRNA水平的變化。 結(jié)果： ①各組大鼠血清E2、T、FSH含量：與正常對照組比較，模型組大鼠血清E2、T水平明顯降低(P<0.01)，F(xiàn)SH水平明顯升高(P<0.01)

4、。與模型組比較，補腎疏肝方組大鼠血清E2、T水平雖有不同程度的升高，但統(tǒng)計學(xué)無顯著性差異(P>0.05)，F(xiàn)SH水平顯著降低(P<0.05)。 ②各組大鼠血漿TXB2含量及TXB2/6-Keto-PGF1α比值比較：與正常對照組比較，模型組大鼠血漿TXB2含量及TXB2/6-Keto-PGF1α比值明顯升高(P<0.05)。與模型組比較，補腎疏肝方組血漿TXB2含量及TXB2/6-Keto-PGF1α比值明顯降低(P<0.05)

5、． ③各組大鼠子宮及腎上腺的濕重系數(shù)及形態(tài)學(xué)改變：與正常對照組比較，模型組大鼠子宮濕重系數(shù)明顯降低(P<0.01)，腎上腺濕重系數(shù)明顯降低(P<0.01)．與模型組比較，補腎疏肝方組大鼠子宮濕重系數(shù)明顯升高(P<0.05)，腎上腺濕重系數(shù)有所升高，但統(tǒng)計學(xué)無顯著性差異(P>0.05)．光鏡下，模型組大鼠子宮各層呈現(xiàn)明顯萎縮性變化；補腎疏肝方組與模型組有類似的萎縮性病理改變，但其內(nèi)膜層病變較模型組減輕，表現(xiàn)在蛻膜細胞趨于典型腺上皮

6、呈低柱狀，可見分泌活動。電鏡下，模型組大鼠子宮內(nèi)膜纖毛細胞游離面纖毛稀疏，胞質(zhì)內(nèi)線粒體腫脹，呈空泡樣改變，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)不豐富，有局部灶狀擴張，形成不規(guī)則的囊腔，未見游離核糖體、致密顆粒及脂滴；補腎疏肝方組子宮內(nèi)膜大鼠纖毛細胞游離面纖毛較模型組略稠密，但不及乙烯雌酚組，線粒體結(jié)構(gòu)數(shù)目尚可，滑面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)數(shù)目豐富，胞質(zhì)內(nèi)有脂滴存在。光鏡下，模型組大鼠腎上腺皮質(zhì)有明顯的萎縮現(xiàn)象，補腎疏肝方組大鼠腎上腺皮質(zhì)萎縮狀況較模型組減輕。 ④各組大鼠子

7、宮內(nèi)膜細胞凋亡率和子宮肌層細胞凋亡率比較：與正常對照組比較，模型組大鼠子宮內(nèi)膜細胞凋亡率明顯升高，約為正常組的4倍(P<0.01)，模型組大鼠子宮肌層細胞凋亡率明顯升高(P<0.05)。與模型組比較，補腎疏肝方組大鼠子宮內(nèi)膜細胞的凋亡率明顯降低(P<0.01)，子宮肌層細胞凋亡率明顯降低(P<0.05)． ⑤各組大鼠ER αmRNA在下丘腦、垂體的表達：與正常對照組比較，模型組大鼠垂體和下丘腦ER αmRNA的表達明顯下降(P<

8、0.05)．與模型組比較，補腎疏肝方組大鼠垂體和下丘腦雌ER αmRNA的表達明顯上升(P<0.05)． 結(jié)論： 本課題提出了“腎虛肝郁”是更年期綜合征基本病機的觀點，首次采用去卵巢加夾尾激怒法成功復(fù)制出腎虛肝郁型更年期綜合征大鼠模型，發(fā)現(xiàn)模型大鼠不僅有腎虛和肝郁的表現(xiàn)，而且還有相應(yīng)的客觀指標(biāo)變化，如血清E2、T水平明顯降低，而FSH水平明顯升高；血漿TXB2水平和TXB2/6-Keto-PGF1a比值均升高；子宮及腎上

9、腺濕重系數(shù)明顯降低；光鏡和電鏡下可見子宮和腎上腺皮質(zhì)有萎縮現(xiàn)象；子宮內(nèi)膜細胞及子宮肌層細胞凋亡率升高；垂體和下丘腦雌激素受體ER αmRNA的表達下降．實驗研究表明，補腎疏肝方能使模型大鼠血清E2、T水平有所升高，而FSH水平降低；血漿TXB2水平和TXB2/6-Keto-PGF1a比值降低；子宮及腎上腺濕重系數(shù)升高；子宮內(nèi)膜層及腎上腺皮質(zhì)萎縮狀況減輕；子宮內(nèi)膜細胞及子宮肌層細胞凋亡率降低；垂體和下丘腦雌激素受體ER αmRNA的表達提