E-cadherin在白血病細(xì)胞的表達.pdf

1、E-鈣黏蛋白(E-cadherin)，又稱為桑椹胚黏著蛋白(Uvomorulin)，是Ca<'2+>依賴性細(xì)胞黏附分子超家族成員之一，介導(dǎo)細(xì)胞-細(xì)胞間的黏附。E-cadherin特異表達于胚胎發(fā)生早期的某些特定階段，促進胚胎細(xì)胞的正常增殖、分化和遷移，對于胚胎的正常發(fā)育和分化起著關(guān)鍵作用。在正常成年人，E-cadherin廣泛表達于上皮來源的各種組織類型的細(xì)胞，在建立穩(wěn)固的上皮組織連接和維持正常組織結(jié)構(gòu)穩(wěn)定中發(fā)揮重要作用。E-cadhe

2、rin基因CDHI是一個典型的抑癌基因，在抑制腫瘤發(fā)生中起著重要作用。大量研究資料表明，E-cadherin不僅是一個腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移抑制分子，在腫瘤發(fā)生的早期階段，也發(fā)現(xiàn)了E-cadherin功能失活，因此也是一個腫瘤發(fā)生抑制分子。 以往關(guān)于E-cadherin的研究主要集中在實體瘤，尤其是上皮來源的腫瘤。在這些腫瘤中，E-cadherin基因經(jīng)常發(fā)生突變，比如彌散型胃癌和小葉型乳腺癌。在一些家族性彌散型胃癌家系中，也發(fā)現(xiàn)了E-

3、cadherin基因胚系突變。E-cadher·in基因CDH，雜合性缺失(LOH)在一些腫瘤如小葉型乳腺癌中也經(jīng)常發(fā)生。在胃腸癌、乳腺癌、前列腺癌等均發(fā)現(xiàn)E-cadherin基因的高度甲基化。 雖然關(guān)于E-cadherin的研究在實體瘤中己趨成熟，但是它在造血發(fā)生中的研究才剛開始。文獻報道E-cadherin表達于正常人的外周血和骨髓單個核細(xì)胞及基質(zhì)細(xì)胞和CD34+的造血干細(xì)胞，介導(dǎo)了造血細(xì)胞與骨髓微環(huán)境基質(zhì)細(xì)胞及基質(zhì)分子的相

4、互作用。與實體瘤相同，在白血病細(xì)胞中也可檢測到E-cadherin基因甲基化，因此推測DNA甲基化會導(dǎo)致E-cadherin在白血病細(xì)胞表達降低，可能促進惡性造血的發(fā)生。基于以上認(rèn)識，本文擬檢測E-cadherin在白血病細(xì)胞的表達，并探討其發(fā)生的可能機制，研究E-cadherin表達改變對白血病細(xì)胞行為的影響，確定E-cadherin介導(dǎo)的細(xì)胞黏附機制改變在白血病發(fā)生中的作用。 本研究主要完成了以下工作： 1．白血病患

5、者及白血病細(xì)胞系E．cadherin的表達：應(yīng)用半定量In：PCR方法檢測100例白血病患者和23例正常骨髓移植供者骨髓單個核細(xì)胞的E—cadherin相對表達水平，發(fā)現(xiàn)和正常人相比，白血病患者E—cadherin表達降低或缺失，非配對t檢驗進行統(tǒng)計學(xué)分析，P值為0.0208，P<0.05，具有統(tǒng)計學(xué)意義；應(yīng)用半定量RT-PCR和甲基化特異性PCR、(MSP)方法檢測各種類型白血病細(xì)胞系E-cadherin的表達，發(fā)現(xiàn)所有白血病細(xì)胞系E

6、-cadherin表達缺失或降低，并且其基因處于完全甲基化狀態(tài)或以甲基化為主的不完全甲基化狀態(tài)。推測基因甲基化導(dǎo)致E-cadherin在白血病細(xì)胞表達缺失或降低。 2．E-cadherin的誘導(dǎo)表達及細(xì)胞行為學(xué)改變：用去甲基化試劑5-Aza-CdR處理E-cadherin完全甲基化的白血病細(xì)胞系U-937， MSP實驗發(fā)現(xiàn)在合適的5-Aza-CdR作用濃度，部分CDHI基因去甲基化，RT-PCR、流式細(xì)胞術(shù)及免疫熒光標(biāo)記檢測到部

7、分細(xì)胞在mRNA和蛋白水平恢復(fù)E-cadherin表達，并且通過E-cadherin特異的細(xì)胞黏附實驗發(fā)現(xiàn)5-Aza-CdR處理72h的細(xì)胞比未經(jīng)處理的細(xì)胞粘附能力增強，E-cadherin的調(diào)節(jié)物可逆轉(zhuǎn)5-Aza-CdR誘導(dǎo)后的細(xì)胞黏附，進一步證明此黏附增強是由E-cadherin獲得表達所致。 綜上所述，我們發(fā)現(xiàn)白血病細(xì)胞中E-cadherin表達降低或缺失，其基因的甲基化是重要機制，去甲基化處理可以重新恢復(fù)部分細(xì)胞E-ca