乳酸菌發(fā)酵麥胚提取物抗腫瘤活性研究.pdf

1、惡性腫瘤疾病已成為人類的主要死因之一，發(fā)病率與死亡率呈持續(xù)上升的趨勢(shì)。目前治療腫瘤的化學(xué)合成藥物均有一定的副作用，因此發(fā)掘安全、有效的食源性抗腫瘤天然產(chǎn)物具有重要意義。小麥胚芽（簡(jiǎn)稱麥胚）是小麥加工過(guò)程的副產(chǎn)物，富含多種生物活性成分，而通過(guò)微生物轉(zhuǎn)化制備的發(fā)酵麥胚提取物具有抗氧化、抗菌、抗腫瘤等多種功效。因此，可采用生物轉(zhuǎn)化方式為麥胚等農(nóng)副產(chǎn)品資源的深度開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。
　　本論文以麥胚為原料，采用乳酸菌發(fā)酵，制備乳酸菌發(fā)酵麥胚

2、提取物(LFWGE)，通過(guò)腫瘤細(xì)胞試驗(yàn)和荷瘤裸鼠試驗(yàn)研究LFWGE對(duì)人HT-29腫瘤細(xì)胞的抑制作用及可能的作用機(jī)制。主要研究?jī)?nèi)容及結(jié)果如下:
　　1.評(píng)價(jià)LFWGE的抗腫瘤活性以及優(yōu)化LFWGE的發(fā)酵條件。結(jié)果表明:LFWGE能夠抑制人結(jié)腸癌HT-29腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng);從4株乳酸菌中篩選出發(fā)酵麥胚抗腫瘤活性最高的菌株，初步篩選出較優(yōu)的發(fā)酵菌株為乳酸菌(Lactobacillusplantarum Dy-1，CGMCC6016);選擇

3、料液比、乳酸菌添加量、發(fā)酵溫度、發(fā)酵時(shí)間為主要影響因素，分析得出最優(yōu)發(fā)酵條件為:料液比為1∶7、乳酸菌添加量為4％、發(fā)酵時(shí)間為30 h、發(fā)酵溫度為30℃，其中2 mg/mL的LFWGE對(duì)腫瘤細(xì)胞的抑制率可達(dá)69.65％。
　　2.研究了LFWGE對(duì)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞抗腫瘤作用。結(jié)果表明:LFWGE能顯著抑制人HT-29腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)，且與濃度和時(shí)間呈正相關(guān)。4 mg/mLLFWGE分別處理腫瘤細(xì)胞24 h、48 h、72 h后

4、，其最大抑制率分別為84.43％、94.13％、94.47％; LFWGE的半致死濃度(IC50)分別為1.29 mg/mL、0.64 mg/mL和0.54 mg/mL。
　　3.研究了LFWGE對(duì)人結(jié)腸癌HT-29細(xì)胞的抗腫瘤機(jī)制。結(jié)果表明:LFWGE可干擾細(xì)胞周期，阻滯細(xì)胞的G0/G1期向S期轉(zhuǎn)變;同時(shí)LFWGE可誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡和壞死，且其濃度和作用時(shí)間與細(xì)胞凋亡和壞死呈正相關(guān);LFWGE也可降低糖酵解過(guò)程中HK和LDH的活力、

5、降低戊糖循環(huán)途徑中G6PDH的活力、上調(diào)凋亡因子Caspase-3、Caspase-7、Caspase-8、Caspase-9 mRNA的表達(dá)以及Caspase-3蛋白的表達(dá)。
　　4.采用裸鼠腹部皮下接種人HT-29腫瘤細(xì)胞建立荷瘤裸鼠模型，研究了LFWGE對(duì)人HT-29荷瘤裸鼠腫瘤細(xì)胞的抑瘤作用。結(jié)果表明:LFWGE具有顯著抑制荷瘤裸鼠腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的作用;5-FU組、混合組、LFWGE高劑量組和LFWGE低劑量組的抑瘤率分別為

6、30.08％、47.80％、41.72％和40.70％，其中LFWGE與5-FU協(xié)同作用的抑瘤率最高。
　　5.研究了LFWGE對(duì)荷瘤裸鼠臟器和血脂水平的作用。結(jié)果表明:LFWGE能夠保護(hù)肝臟和脾臟;且能夠維持荷瘤裸鼠血清中TC、HDL、GLU的含量;同時(shí)能夠降低荷瘤裸鼠血清中TG的含量。
　　6.研究了LFWGE對(duì)荷瘤裸鼠的抗氧化能力和免疫因子的作用。結(jié)果表明:LFWGE能提高肝臟中SOD、CAT、T-AOC、GSH-PX

7、的活力，減少M(fèi)DA的含量;LFWGE也可增加血清中免疫因子IFN-γ、 IL-4以及TNF-α的表達(dá)。LFWGE的抑瘤作用可能是通過(guò)增強(qiáng)機(jī)體的抗氧化能力和提高機(jī)體的自身免疫力來(lái)實(shí)現(xiàn)的。
　　7.研究了LFWGE對(duì)荷瘤裸鼠腫瘤細(xì)胞的抑制機(jī)制。結(jié)果表明:LFWGE可調(diào)節(jié)STAT3信號(hào)通路，通過(guò)上調(diào)Bax、Caspase-3 mRNA的表達(dá)以及下調(diào)Bcl-2、CyclinD1的mRNA的表達(dá);同時(shí)上調(diào)Bax和Caspase-3的蛋白表達(dá)