精漿中白介素23的含量測定及與精液質(zhì)量的關(guān)系.pdf

1、細(xì)胞因子與人類生殖的關(guān)系正得到廣泛的研究，因為它們涉及到生殖生理和生育調(diào)節(jié)的各個方面。人的精漿中含有轉(zhuǎn)化生長因子(TGF)、表皮生長因子(EGF)、腫瘤壞死因子α(TNF-α)、白介素(IL)、干擾素γ(IFN-γ)以及一些可溶性受體，它們來自于男性生殖道的不同部位，可能對生殖系統(tǒng)的甾體激素合成、精子細(xì)胞的發(fā)育、及精子功能產(chǎn)生影響。人精漿中存在炎癥性細(xì)胞因子，主要來自于白細(xì)胞中的巨噬細(xì)胞，在外來抗原、病原體和慢性炎癥的情況下激活產(chǎn)生。這

2、些細(xì)胞因子主要包括IL-1、IL-6、IL-8、IL-12、TNF-α、IFN-γ等。在體外實驗中，一些細(xì)胞因子，如IL-1、IL-6、TNF-α、IFN-γ等，可影響人精子活動力，增加精子細(xì)胞活性氧的產(chǎn)生，降低精子的穿卵能力；IL-1、TNF-α可以抑制睪丸酮(T)的產(chǎn)生；TNF-α可以顯著抑制精子的頂體酶活性和頂體反應(yīng)。IL-23是2000年新發(fā)現(xiàn)的炎癥性細(xì)胞因子，自身獨特的p19亞基與IL-12的p40亞基通過二硫鍵形成異源二聚體

3、細(xì)胞因子(p40p19)，它主要來源于活化單核巨噬細(xì)胞和樹突細(xì)胞，通過作用于記憶性T細(xì)胞和炎癥性巨噬細(xì)胞的IL-23受體而發(fā)揮功能。IL-23具有多種生物學(xué)功能，能促進(jìn)T細(xì)胞尤其是CD4+T細(xì)胞增殖，促進(jìn)T細(xì)胞、抗原提呈細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ與IL-12，對樹突細(xì)胞的共刺激功能起調(diào)節(jié)作用，具有抗腫瘤和抗轉(zhuǎn)移活性，而且與自身免疫和炎癥反應(yīng)疾病密切相關(guān)。在轉(zhuǎn)基因小鼠實驗中，廣泛表達(dá)p19的轉(zhuǎn)基因小鼠有嚴(yán)重的生長和生育方面的缺陷。至今，國內(nèi)外未發(fā)

4、現(xiàn)有關(guān)IL-23與人精液質(zhì)量關(guān)系的文獻(xiàn)報道。本課題在對研究對象進(jìn)行精液常規(guī)參數(shù)、精子形態(tài)檢查的基礎(chǔ)上，檢測了人精漿中IL-23、IL-6、IL-8、TNF-α的含量，同時檢測了其血清T、FSH、LH值，并對IL-23與精漿中IL-6、IL-8、TNF-α含量的關(guān)系及其與精液常規(guī)參數(shù)、精子形態(tài)、血生殖激素之間的關(guān)系進(jìn)行了分析。現(xiàn)將結(jié)果報道如下。 1.材料與方法 1.1標(biāo)本來源 1.1.1 2007年5～6月共收集5

5、7份人類精液標(biāo)本，其中45份來自浙江省人類精子庫的供精志愿者，共45例，年齡20～25周歲，平均(21.8±1.1)周歲，全部為在校學(xué)生，未婚；其余12份來自浙江省計劃生育?？崎T診部就診的男性不育癥病人，未經(jīng)抗生素治療，共12例，年齡26～38周歲，平均(30.1±3.6)周歲。 1.1.2分組：根據(jù)WHO正常人前向運動精子(a級+b級)百分率和精子密度參考值將57份人類精液標(biāo)本分成兩組，其中精子密度≥20×106／ml且a+b

6、≥50％作為精液質(zhì)量正常組(35份)；密度<20×106／ml或a+b<50％、或密度<20×106／ml且a+b<50％為異常組(22份)。 本研究中不包括無精子癥和白細(xì)胞精子癥病人，所有研究對象外生殖器檢查均無異常；雙側(cè)睪丸均≥12ml；尿常規(guī)檢查白細(xì)胞陰性。 1.2方法 1.2.1精液標(biāo)本收集：所有受試者均禁欲3—5天，以手淫法采集精液于無菌燒杯內(nèi)，置37℃水浴箱內(nèi)液化后備查。 1.2.2精液常規(guī)分

7、析：待精液完全液化后，按《WHO人類精液及精子-宮頸粘液相互作用實驗室檢驗手冊》(第四版)進(jìn)行精液分析，內(nèi)容包括精液量、PH值、液化時間、外觀、精子密度、精子活力、活動率等指標(biāo)。 1.2.3精子形態(tài)染色及分析：待精液液化后，將精液滴于潔凈玻片上，推成薄片，自然干燥后，改良巴氏染色，樹膠封固。精子形態(tài)分析按《WHO人類精液及精子-宮頸粘液相互作用實驗室檢驗手冊》(第四版)進(jìn)行。油鏡下觀察，計數(shù)至少200個精子以上，按標(biāo)準(zhǔn)對精子形態(tài)

8、進(jìn)行分類，并分別記錄其結(jié)果。包括正常精子百分率、頭部異常百分率、頸部及中段異常百分率、尾部異常百分率、胞漿小滴百分率。 1.2.4精漿中IL-23、IL-6、IL-8及TNF-α水平測定：取部分完全液化后的精液以3 000 rpm／分鐘離心20分鐘，分離精漿保存于-20℃待行各種細(xì)胞因子的檢測。采用上海博光生物科技有限公司進(jìn)口分裝試劑盒，應(yīng)用ELISA夾心法測定精漿中IL-23、IL-6、IL-8及TNF-α含量。 1.

9、2.5血清T、FSH、LH測定：所用儀器為德國拜耳(Bayer)公司ACS：18O SE全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)(system)，其靈敏度可達(dá)10-12g／L；所用試劑均為隨機(jī)配套試劑。 1.2.6統(tǒng)計學(xué)分析：所有數(shù)據(jù)以mean±SD表示，組與組均值之間比較采用獨立樣本t檢驗，相關(guān)分析采用線性回歸法。采用SPSS 11.5統(tǒng)計軟件包進(jìn)行分析。 2.結(jié)果 2.1從精液分析的結(jié)果顯示，精液質(zhì)量正常組的精子密度、前向

10、運動百分率、活動率、存活率及精子形態(tài)正常率均顯著高于異常組。PH值無顯著差異。 2.2所有標(biāo)本的精漿中均可檢測到IL-23，含量為8.19±4.60pg／ml，范圍1.44-19.35pg／ml。 2.3精液質(zhì)量正常組的精漿IL-23含量為6.37±3.58pg／ml。精液質(zhì)量異常組的精漿IL-23含量為11.08±4.63 pg／ml，顯著高于精液質(zhì)量正常組的IL-23含量。進(jìn)一步分析顯示，精漿IL-23含量在前向運動

11、精子(a+b)<50％的研究對象中明顯高于前向運動精子≥50％的研究對象，相關(guān)系數(shù)r=-0.429，IL-23的含量與前向運動精子百分率呈負(fù)相關(guān)；精漿中IL-23的含量與精子正常形態(tài)率的相關(guān)系數(shù)r=-0.266，精漿中IL-23的含量與精子正常形態(tài)率存在負(fù)相關(guān)。 2.4精漿中IL-23含量與IL-6、IL-8和TNF-α的關(guān)系 經(jīng)相關(guān)性分析后，精漿中IL-23含量與精漿中IL-6、IL-8和TNF-α含量的相關(guān)系數(shù)分別為

12、0.820、0.586和0.516，均存在顯著的正相關(guān)。2.5精漿中IL-23含量與血清FSH、LH、T含量的關(guān)系精漿中IL-23的含量分別與血清FSH、LH、T水平經(jīng)相關(guān)性分析后，其結(jié)果顯示均不存在相關(guān)性。 3.結(jié)論 人類精漿中存在IL-23，精液質(zhì)量正常的研究對象精漿中含量為6.37±3.58pg／ml；精液質(zhì)量異常的研究對象精漿中IL-23含量明顯升高(11.08±4.63pg／ml)；精漿中IL-23含量與前向運