非甾體抗炎藥對大鼠小腸黏膜的影響.pdf

1、目的：非甾體抗炎藥(non—steroidal anti—inflammatory drugs，NSAIDs)是一類不含有甾體結構的抗炎藥，該類藥物具有抗炎、抗風濕、止痛、退熱和抗凝血等作用。在臨床上，短期服用NSAIDs主要用于緩解各種疼痛、退熱及圍手術期的鎮(zhèn)痛，長期服用主要用于治療類風濕性關節(jié)炎(rheumatiod arthritis，RA)及骨性關節(jié)炎(osteoarthritis，OA)，此外尚可用于治療痛風性關節(jié)炎、強直性脊

2、柱炎、脊椎關節(jié)炎等，也可用于治療一些急性非炎癥性疾病，如急性肌肉骨胳疾病，下腰背部疼痛、關節(jié)痛、普通感冒、急性痛風等。目前NSAIDs是全球使用最多的藥物種類之一。據(jù)估計全世界每年NSAIDs處方在10億張以上，每天約有近3000萬人服用NSAIDs。 NSAIDs雖然在臨床上應用廣泛，但卻有明顯不良反應，其中最常見、也最具臨床意義的就是胃腸黏膜損傷。有研究證實，在美國發(fā)生的藥物不良反應中，21％為NSAIDs所致的胃腸道反應

3、。在英國，報道的藥物不良反應中25％與應用NSAIDs有關。NSAIDs所致胃腸道損害常見的有出血、穿孔和幽門梗阻，還可引起過敏反應、肝腎功能損害及血液系統(tǒng)、皮膚結締組織和呼吸系統(tǒng)并發(fā)癥。在美國，每年約6000人死亡歸咎于服用NSAIDs。 NSAIDs相關的胃腸道不良反應是一個極為廣泛的概念，既包括諸如惡心，燒心、消化不良等癥狀，又包括消化性潰瘍(peptic ulcer，PU)及其嚴重并發(fā)癥，如出血、穿孔、胃排空障礙等，甚

4、至可導致患者死亡。每年約2％～4％的NSAIDs使用者會出現(xiàn)嚴重的胃腸并發(fā)癥。由于這些并發(fā)癥的發(fā)生常無任何報警癥狀，因此臨床危害極大。 長期以來人們比較重視NSAIDs引起的胃損害，而流行病學調查顯示由于服用NSAIDs引起下消化道的副作用也值得關注。但目前國內外有關NSAIDs引起下消化道黏膜尤其是小腸黏膜損害的研究報道甚少。隨著非處方藥(over thecounter，OTC)類的NSAIDs的廣泛應用，NSAIDs所致小腸

5、黏膜損傷日漸突出，但由于癥狀隱匿，人們對其沒有足夠的認識，缺乏有效的診斷手段而誤診、漏診，延誤病情，由此引發(fā)的小腸損害發(fā)病率將進一步增長。因此，應加強對NSAIDs相關性下消化道黏膜損傷的研究，以利防治。 本研究旨在觀察非甾體抗炎藥對大鼠小腸黏膜屏障的影響及形態(tài)變化，探討提高保護患者腸黏膜屏障功能的辦法。 材料與方法： 一、實驗動物及分組 32只12周齡雄性Sprague—Dawley大鼠，體質量200g

6、-220g，由浙江中醫(yī)藥大學動物實驗中心提供；分為藥物損傷模型組和對照組，各16只；2組大鼠分別于給藥后第1d(24h)和5d進行有關指標的觀察和測定，各時相點均為8只。 二、方法 1、動物損傷模型制備：將雙氯芬酸鈉(戴芬，藤澤德國公司，國藥準字J20050064)溶入0.9％生理鹽水，參照人類長期口服劑量(150mg/d)折算成大鼠口服劑量：15 mg/kg·d．，分2次灌胃(將雙氯芬酸鈉150mg置入生理鹽水100m

7、l中，超聲乳化后配置成1.5mg/ml的混懸液，然后根據(jù)大鼠體質量按1ml/100g劑量灌胃．)，對照組使用相同劑量(1ml/100g)的生理鹽水。2組大鼠分別于給藥后第1d(24h)和第5d處死，取空腸、回腸進行觀察。 2、胃、小腸大體損傷評分：大鼠禁食不禁水24h，用1％戊巴比妥鈉腹腔內注射麻醉后處死。剖腹取出胃，沿胃大彎剪出胃壁并使胃腔黏膜外翻，生理鹽水漂洗3遍胃黏膜后，以游標卡尺測定潰瘍指數(shù)，按Guth標準詳細記分。小腸

8、黏膜大體損傷評分按潰瘍和粘連分別進行評分，總分為兩者之和。 3、小腸黏膜組織處理及形態(tài)學觀察：距幽門25cm處切取空腸腸段2 cm，備用。距回盲部5cm處向近端切取回腸腸段2 cm，備用。將切取之組織放入10％福爾馬林溶液中固定。常規(guī)切片，HE染色，采用Chiu氏6級評分法評價腸黏膜損傷程度。光鏡下每個樣本隨機計數(shù)20個視野。Carl Zeiss Imaging Systems圖像分析系統(tǒng)進行絨毛高度、黏膜厚度、黏膜截面積等定量

9、分析。 4、腸黏膜超微結構觀察：各組分別取1mm×1 mm末段回腸組織標本，2.5％戊二醛固定。經脫水、置換等步驟后用透射電子顯微鏡觀察腸黏膜超微結構。 5、EGF免疫組織化學檢測及圖像分析：采用免疫組織化學方法(二步法)。自動染色機復染、透明后封片，顯微鏡下觀察，以胞漿和/或質膜著棕色者為陽性染色。 每張切片所要分析的部位顯微鏡下拍攝3-5張照片，單盲情況下進行圖象分析，計算陽性面積、總光密度和陽性指數(shù)。

10、 三、統(tǒng)計學處理 正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以．(-X)±s表示，采用單因素方差分析；非正態(tài)分布的數(shù)據(jù)以中位數(shù)及四分位全距表示，采用秩和檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。 結果： 一、形態(tài)組織學改變 1、胃、小腸黏膜大體觀察：對照組大鼠灌胃后全部存活；而模型組于第4天死亡1只。模型組胃黏膜損傷評分與對照組無統(tǒng)計學差異。模型組第1d小腸黏膜散在紅斑、糜爛和潰瘍，潰瘍廷腸系膜側分布；第5d小腸黏膜可見出血、穿孔和

11、竇道形成，其大體損傷評分均高于對照組(P＜0.05)。 2、光學顯微鏡下組織學改變：對照組大鼠小腸黏膜結構完整，偶可見絨毛上皮缺損和少量炎性細胞浸潤。造模組第1d大鼠可見腸絨毛腫脹、縮短、增粗，頂端部分破損或斷裂；第5d可見黏膜局灶糜爛、壞死，黏膜下間隙增大，固有層水腫明顯伴炎癥細胞浸潤，出現(xiàn)上皮細胞變性、壞死，部分絨毛融合、縮短，甚至壞死、脫落、缺損，造成固有層裸露，黏膜和黏膜下層大量中性粒細胞浸潤，第1d和第5d Chiu氏

12、評分中位數(shù)分別為3.5分和5分，與對照組評分中位數(shù)0分相比，差異具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。造模第1d大鼠空、回腸絨毛高度分別為126.9±32.0μm和118.6±22.9μm，較對照組顯著降低(169.2±25.5μm和145.8±25.2μm，P＜0.05)，而空、回腸黏膜厚度、黏膜截面積和對照組相比差異無顯著性，但有下降趨勢；第5d大鼠空、回腸絨毛高度(73.4±25.4μm和109.3±17.6μm)與對照組相比(164.

13、7±21.2μm和155.7±48.0μm)顯著降低；黏膜厚度(123.8±51.6μm和165.7±37.4μm)與對照組相比(235.7±48.0μm和236.3±60.9μm)顯著變?。火つそ孛娣e(2.48±1.01 mm2和3.27±0.76 mm2)與對照組相比(4.66±2.11 mm2和4.54±1.12 mm2)顯著變小，差異均具有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。 3、超微病理結構變化：透射電鏡下見模型組第1d大鼠小

14、腸黏膜微絨毛水腫、排列紊亂；線粒體腫脹，部分峪減少，內質網出現(xiàn)不同程度擴張。細胞間連接開始出現(xiàn)部分增寬，第5d小腸黏膜上皮微絨毛脫落更為明顯，細胞連接斷裂破壞嚴重。 二、EGF表達變化 免疫組化示EGF陽性表達主要見于小腸絨毛膜上皮細胞、毛細血管內皮細胞胞漿。造模第1d，大鼠空、回腸黏膜EGF陽性面積(3409.85±1514.32μm2和3874.09±1313.03μm2)、總光密度(1203.13±569.90和1

15、339.49±467.72)和陽性指數(shù)(0.017±0.008和0.019±0.006)較對照組(7495.11±4557.88μm2和7703.04±4165.60μm2；2952.20±2047.92和2873.31±1749.19；0.041±0.028和0.040±0.024)顯著下降(P＜0.05)，空、回腸黏膜EGF表達無顯著差異。第5d空、回腸黏膜陽性面積(3193.45±1695.65μm2和2919.19±1671.5

16、5μm2)、總光密度(1120.44±639.58和1034.45±615.47)和陽性指數(shù)(0.016±0.009和0.014±0.008)較對照組(6502.51±2364.60μm2和7001.04±1894.89μm2；2471.33±1037.67和2623.44±796.39；0.034±0.014和0.034±0.011)下降明顯(P＜0.05)，但與第1d相比，雖有下降趨勢，但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。 結論

17、： 1、常規(guī)治療劑量雙氯氛酸鈉口服所引起的大鼠小腸黏膜損害比胃粘膜損害更常見和顯著。其主要致病機制包括直接黏膜破壞、線粒體傷害、細胞間連接完整性的破壞而使上皮通透性增高。 2、常規(guī)治療劑量雙氯氛酸鈉可致大鼠小腸黏膜機械屏障功能受損，大體表現(xiàn)為紅斑、糜爛、潰瘍、穿孔和竇道形成，其潰瘍多沿腸系膜側分布；組織學表現(xiàn)為小腸黏膜上皮細胞變性、壞死、剝脫，小腸絨毛融合、縮短，甚至壞死、脫落、缺損，造成固有層裸露?？?、回腸絨毛高度顯著