骨髓來源細(xì)胞移植對(duì)糖尿病小鼠血糖的影響及作用機(jī)制的研究.pdf

1、糖尿病是一種常見的內(nèi)分泌疾病，發(fā)病率在全世界范圍內(nèi)逐年上升。目前糖尿病的主要治療方法有口服藥物、注射胰島素、胰腺移植以及胰島移植等，然而都有各自的缺點(diǎn)。研究表明，骨髓來源細(xì)胞包含多種干細(xì)胞，具有取材方便、分離培養(yǎng)容易等優(yōu)點(diǎn)。骨髓來源細(xì)胞移植能改善組織損傷動(dòng)物模型的功能，臨床上已經(jīng)用于治療心血管疾病并取得了良好的效果。本研究旨在闡明骨髓來源細(xì)胞移植對(duì)糖尿病小鼠血糖的影響及作用機(jī)制，為糖尿病提供更理想的治療方法。為此，首先采用小劑量多次腹腔

2、內(nèi)注射鏈脲霉菌素(STZ)的方法制作糖尿病小鼠模型，然后用密度梯度離心法分離骨髓細(xì)胞，再經(jīng)尾靜脈移植至糖尿病小鼠體內(nèi)。移植后每周固定時(shí)間測(cè)量小鼠血糖，移植后第4周發(fā)現(xiàn)接受骨髓來源細(xì)胞移植的糖尿病小鼠血糖明顯下降，降幅平均值約為7mmol/L，并維持穩(wěn)定至移植后第6周。移植后第6周處死骨髓移植組小鼠，觀察其胰腺組織學(xué)變化。胰腺組織HE染色發(fā)現(xiàn)接受骨髓來源細(xì)胞移植的糖尿病小鼠胰島形態(tài)接近正常胰島，數(shù)目明顯增多，并發(fā)現(xiàn)新生的胰島。這些新生的胰

3、島大多出現(xiàn)在胰腺導(dǎo)管周圍。胰島素免疫熒光發(fā)現(xiàn)較多孤立的胰島素陽性細(xì)胞以及由兩三個(gè)胰島素陽性細(xì)胞組成的胰島。通過胰島素和胰高血糖素免疫熒光雙標(biāo)，在部分胰島內(nèi)和胰島外發(fā)現(xiàn)了胰島素和胰高血糖素雙陽性的細(xì)胞。目前的研究表明這種細(xì)胞只在干細(xì)胞向胰島細(xì)胞分化的過程中出現(xiàn)。因此，認(rèn)為成體胰腺組織中存在一類具有干細(xì)胞特性的細(xì)胞，新生的胰島β細(xì)胞是由這類胰腺干細(xì)胞轉(zhuǎn)分化而來：胰島內(nèi)胰島素陽性的細(xì)胞是由胰島內(nèi)分泌前體細(xì)胞分化而來或α細(xì)胞轉(zhuǎn)分化而來，而胰島外

4、胰島素陽性的細(xì)胞由胰島外具有干細(xì)胞特性的內(nèi)分泌前體細(xì)胞(可能是胰腺外分泌細(xì)胞、胰腺導(dǎo)管細(xì)胞)分化而來，再增殖為新胰島。胰島素和胰高血糖素雙陽性細(xì)胞的出現(xiàn)也表明α細(xì)胞和β細(xì)胞來源于共同的內(nèi)分泌前體細(xì)胞。 研究表明骨髓來源細(xì)胞具有多向分化的潛能，為了進(jìn)一步闡明糖尿病小鼠血糖的降低是否由于移植的骨髓來源細(xì)胞在糖尿病小鼠體內(nèi)轉(zhuǎn)分化為胰島細(xì)胞引起。將綠色熒光蛋白(GFP)轉(zhuǎn)基因小鼠骨髓來源細(xì)胞移植至糖尿病小鼠體內(nèi)，血糖出現(xiàn)明顯下降后(約移

5、植后4周)處死小鼠，觀察GFP陽性細(xì)胞的相關(guān)表型。Nkx6.1、Nkx2.2、Pax4、Pax6、Ngn3、NeuroD、PDX—l是胰島細(xì)胞不同發(fā)育階段的標(biāo)記物。Nestin是一種中間絲蛋白，在神經(jīng)干細(xì)胞和胰腺干細(xì)胞中都表達(dá)。選擇Insulin、GlLmagon、Nestin、Nkx6.1、Nkx2.2、Pax4、Pax6、Ngn3、NetlroD、PDX-1分別和GFP進(jìn)行免疫熒光雙標(biāo)，結(jié)果在接受骨髓細(xì)胞移植的糖尿病小鼠胰腺中沒有發(fā)