TPA基因局部定位轉(zhuǎn)移預防靶器官血栓形成的實驗研究.pdf

1、第一部分TPA基因預防移植靜脈再狹窄的實驗研究 實驗一pcDNA3.1-Myc-HisB(-)/tPA基因新型 真核表達載體的構(gòu)建和鑒定 目的:構(gòu)建人組織型纖溶酶原激活因子(tPA)基因的新型真核表達載體，為血栓相關(guān)性疾病的基因治療奠定基礎(chǔ)。 結(jié)論:成功構(gòu)建pcDNA3.1-Myc-HisB(-)/t-PA基因新型真核表達載體。 實驗二轉(zhuǎn)tPA基因內(nèi)皮細胞纖溶活性的變化 目的:觀察轉(zhuǎn)染人組

2、織型纖溶酶原激活因子(tPA)基因的人臍靜脈內(nèi)皮細胞(HUVEC)纖溶酶活性變化。 結(jié)論:構(gòu)建的pcDNA3.1-Myc-HisB(-)/tPA基因新型真核表達載體，能在HUVEC中表達，其表達具有高拷貝、穩(wěn)定性好的特點，獲得的表達蛋白活性較高，提示本載體和穩(wěn)定表達tPA基因的人臍靜脈內(nèi)皮株能夠作為基因治療工具用于哺乳動物的實驗研究。 實驗三TPA基因體外轉(zhuǎn)染對血管平滑肌細胞增殖和遷移的影響 目的:探討tPA基因

3、體外轉(zhuǎn)染對鼠血管平滑肌細胞(VSMC)黏附、增殖和遷移的影響，為tPA基因在預防移植血管再狹窄中的應用奠定理論基礎(chǔ)。 結(jié)論:轉(zhuǎn)tPA基因血管平滑肌細胞纖溶活性增高，但對血管平滑肌細胞的黏附、增殖和遷移能力沒有影響。 實驗四局部轉(zhuǎn)染TPA基因?qū)σ浦察o脈再狹窄的影響 目的:觀察組織型纖溶酶原激活因子(tPA)局部轉(zhuǎn)基因表達對移植靜脈血栓形成和內(nèi)膜增生的影響并探討其機制。 結(jié)論:局部轉(zhuǎn)染tPA基因，能抑制移植靜

4、脈血栓形成，減輕新內(nèi)膜的增殖，從而有效預防再狹窄的發(fā)生，其機制可能是通過抑制PDGF和TGF-β1的過度表達而實現(xiàn)的。 第二部分明膠涂層的Dacron滌綸片攜帶tPA基因局部定位轉(zhuǎn)移對兔左房血纖溶活性的影響 目的:探討tPA基因左心房局部定位轉(zhuǎn)移對兔左房血及外周血纖溶活性的影響。 結(jié)論:明膠蛋白涂層可作為一種有效的基因轉(zhuǎn)移方法；攜帶tPA基因的明膠涂層的Dacron片，植入兔左心耳，能在局部表達、分泌tPA蛋白，