羅格列酮對大鼠血管平滑肌細(xì)胞凋亡和轉(zhuǎn)化生長因子-β1分泌的影響.pdf

1、目的：觀察羅格列酮對大鼠血管平滑肌細(xì)胞（AVSMC）凋亡及轉(zhuǎn)化生長因子-β1（TGF-β1）分泌的影響。 方法：酶消化法原代提取SD大鼠胸主動脈平滑肌細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng)，取5-8代細(xì)胞進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。無血清培養(yǎng)培養(yǎng)24小時(shí)后分別采用0、25、50、100、200、400umol/L羅格列酮處理，流式細(xì)胞學(xué)檢測凋亡率，發(fā)現(xiàn)100umol/L為凋亡誘導(dǎo)的最佳濃度。最佳濃度羅格列酮處理，分別于0、0.5、1、3、6、18、24小時(shí)各取培養(yǎng)基5

2、0ul，酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)法檢測培養(yǎng)基中TGF- β1的水平，發(fā)現(xiàn)0.5小時(shí)TGF- β1的水平最高。同樣方法培養(yǎng)24小時(shí)，分四組，對照組、100umol/L羅格列酮組、100umol/L羅格列酮+ GW9662（PPAR-γ阻斷劑）組、100umol/L羅格列酮+ anti- TGF-β1（抗TGF-β1抗體）組，0.5小時(shí)取培養(yǎng)基50ulELISA法檢測TGF- β1水平,24小時(shí)后流式細(xì)胞學(xué)和原位細(xì)胞凋亡檢測試劑盒法（

3、TUNEL）檢測細(xì)胞凋亡。 結(jié)果：觀察發(fā)現(xiàn)羅格列酮組細(xì)胞凋亡率較對照組增加（P〈0.05）,并且隨著羅格列酮濃度的增加VSMC凋亡率越來越高（P〈0.05），100umol/L時(shí)其凋亡達(dá)到最高（P〈0.05），而濃度超過100umol/L凋亡率并不增加甚至降低，提示羅格列酮誘導(dǎo)VSMC凋亡在一定范圍內(nèi)存在濃度依賴;并且羅格列酮100umol/L+ GW9662組和羅格列酮100umol/L+ anti- TGF-β1組細(xì)胞凋亡率

4、較羅格列酮100umol/L組降低（P〈0.05），提示GW9662和anti- TGF-β1均可逆轉(zhuǎn)羅格列酮誘導(dǎo)的VSMC凋亡。羅格列酮100umol/L處理后0.5小時(shí)內(nèi)TGF-β1水平明顯高于對照組（P〈0.05），且0.5小時(shí)達(dá)到最高（P〈0.05）,TGF-β1水平達(dá)到最高后又快速下降（P〈0.05），提示羅格列酮可誘導(dǎo)VSMC快速分泌TGF-β1；并且羅格列酮100umol/L+ GW9662組TGF-β1水平較羅格列酮10