蛋白激酶C同工酶在大鼠實(shí)驗(yàn)性腦出血時(shí)表達(dá)及西比靈的干預(yù)機(jī)制.pdf

1、背景及目的:腦出血后繼發(fā)性腦損害的病理生理機(jī)制較為復(fù)雜,是多因素綜合作用的結(jié)果.由于對(duì)腦出血后神經(jīng)損傷的病理生理機(jī)制缺乏深入研究,故目前腦出血臨床治療方法主要是降低顱高壓及防止出血后并發(fā)癥,而對(duì)出血后血腫周?chē)窠?jīng)細(xì)胞損傷尚無(wú)有效治療手段.目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)一些因素參與腦出血后神經(jīng)損傷如凝血酶原活性的增加、紅細(xì)胞代謝產(chǎn)物的釋放、腦血流量的下降、血腫的機(jī)械壓迫等.既往的研究表明,許多病理過(guò)程(如缺血/再灌流)可以誘導(dǎo)細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的異常.細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)

2、導(dǎo)的異常介導(dǎo)了病理?xiàng)l件下的神經(jīng)元損傷,可以引起神經(jīng)元的壞死和/或凋亡.而在細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)異常中,蛋白激酶的異常起著重要的作用.有關(guān)研究表明腦出血周?chē)[形成與出血灶周?chē)哪X缺血有關(guān),提示血腫周?chē)嬖谌毖?再灌流等病理過(guò)程.因此我們?cè)O(shè)想,腦出血條件下,是否也由于某些因素觸發(fā)了出血灶周?chē)窠?jīng)元細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的異常,從而導(dǎo)致了血腫周?chē)窠?jīng)元的損傷呢?這一問(wèn)題的研究現(xiàn)國(guó)內(nèi)外仍未見(jiàn)報(bào)道.目前國(guó)內(nèi)外研究發(fā)現(xiàn)腦出血后神經(jīng)元損傷主要與下列因素有關(guān),如凝血酶

3、原活性的增加、紅細(xì)胞代謝產(chǎn)物的釋放、腦血流量的下降、血腫的機(jī)械壓迫等.故該實(shí)驗(yàn)旨在從細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑為突破口探討血腫周?chē)窠?jīng)元損傷的機(jī)理及干預(yù),為臨床腦出血的治療提供新的理論依據(jù).傳統(tǒng)的觀(guān)念認(rèn)為,鈣通道阻滯劑可以引起血管的擴(kuò)張,從而誘發(fā)血腫的擴(kuò)大及加重腦水腫,從而限制了鈣通道阻滯劑在腦出血中的應(yīng)用.但已有研究證實(shí)鈣超載是導(dǎo)致缺血性腦損傷的重要因素,決定了鈣通道阻滯劑作為細(xì)胞保護(hù)劑的重要位置.所以該實(shí)驗(yàn)選擇西比靈作為干預(yù)藥物,進(jìn)一步評(píng)價(jià)鈣

4、通道阻滯劑在腦出血中的作用.方法:參照Rosenberg法以膠原酶法制得Wistar大鼠基底節(jié)區(qū)出血模型,應(yīng)用神經(jīng)病理、免疫組化、TUNEL法、Fura-2熒光探針?lè)半娚淼燃夹g(shù),觀(guān)察腦出血后不同時(shí)相點(diǎn)蛋白激酶C同工酶表達(dá)、細(xì)胞內(nèi)游離鈣變化與血腫周?chē)窠?jīng)元凋亡、神經(jīng)功能缺失變化之間的關(guān)系,同時(shí)觀(guān)察鈣通道阻滯劑西比靈對(duì)上述指標(biāo)的影響.結(jié)果:1. 蛋白激酶C同工酶在實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠腦組織中大量表達(dá),主要分布于海馬,皮層等腦區(qū),以出血周?chē)鷧^(qū)

5、明顯;2. 腦出血后血腫周?chē)?xì)胞內(nèi)游離鈣濃度增高,并具有時(shí)點(diǎn)特異性:出血后0.5h[Ca<'2+>]<,i>明顯升高(P<0.01=),出血后6h、24h顯著升高,72h呈下降趨勢(shì),120h明顯下降但仍高于出血前水平;3. 腦出血后血腫周?chē)蛲黾?xì)胞表達(dá)增高,0.5h開(kāi)始升高,72h達(dá)高峰;4. 西比靈對(duì)腦出血后血腫周?chē)?xì)胞內(nèi)游離鈣超載及兩種PKC同工酶表達(dá)上調(diào)及凋亡細(xì)胞高表達(dá)有明顯抑制作用, 同時(shí)明顯改善出血后體感誘發(fā)電位P1-N1峰峰

6、波幅降低及P1-N1潛伏期延長(zhǎng),其結(jié)果有顯著差異性.結(jié)論1. 實(shí)驗(yàn)性腦出血可誘導(dǎo)血腫周?chē)窠?jīng)元PKC表達(dá)上調(diào)且具有同工酶特異性.PKC上調(diào)機(jī)理尚不清楚,可能與出血灶周?chē)毖毖醯扔嘘P(guān).2.腦出血后PKC表達(dá)上調(diào)及胞內(nèi)鈣超載與凋亡現(xiàn)象成正相關(guān),表明腦細(xì)胞信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑參與腦出血后神經(jīng)元損傷的病理生理改變.3.西比靈對(duì)細(xì)胞內(nèi)游離鈣及兩種PKC同工酶表達(dá)及凋亡細(xì)胞表達(dá)有明顯抑制作用,對(duì)腦出血?jiǎng)游锷窠?jīng)功能缺失有明顯的修復(fù)作用,對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血神經(jīng)元