Nampt基因多態(tài)性對(duì)2型糖尿病患者瑞格列奈療效的影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：煙酰胺磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶(nicotinamidephosphoribosyltransferase，Nampt)能夠調(diào)節(jié)胰島β細(xì)胞分泌胰島素的過程，在糖尿病的發(fā)生發(fā)展中可能發(fā)揮重要的直接或間接作用。本課題旨在分析Nampt基因-948G>T和-3186C>T突變?cè)谥袊系貐^(qū)漢族T2DM人群中的分布頻率及其與T2DM發(fā)生的關(guān)系；探討這些突變對(duì)瑞格列奈治療T2DM的療效的影響；在細(xì)胞水平研究Nampt對(duì)胰島素分泌的調(diào)節(jié)作用及其對(duì)與胰島

2、素分泌相關(guān)的重要轉(zhuǎn)錄因子PDX-1、FoxO1基因表達(dá)的影響。
　　 方法：采用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)-限制性片斷長度多態(tài)性(PCR-RFLP)對(duì)154名2型糖尿病患者和142名健康對(duì)照者進(jìn)行Nampt-948G>T基因型分析，對(duì)170名2型糖尿病患者和129名健康對(duì)照者進(jìn)行Nampt-3186C>T基因型分析，隨機(jī)選擇部分樣品應(yīng)用直接測序法驗(yàn)證PCR-RFLP結(jié)果；選取-3186C>T不同基因型的40名糖尿病患者進(jìn)行OATP1B152

3、1T>C基因分型；選擇35名OATPlB1521TT基因型相同的個(gè)體，每天口服3mg瑞格列奈，持續(xù)8周，服藥前和服藥后第8周末收集血標(biāo)本5ml;采用酶氧化法測定血糖、放射免疫法測定胰島素、高效液相色譜法測定HbAlc等反映療效的指標(biāo)。用大鼠胰島素ELISA試劑盒檢測RIN-m5f細(xì)胞胰島素分泌水平。用Real-timePCR的方法檢測RIN-m5f細(xì)胞PDX-1和FoxO1的mRNA表達(dá)水平。用western-blotting的方法檢測

4、RIN-m5f細(xì)胞PDX-1蛋白表達(dá)水平。
　　 結(jié)果：Nampt基因-948位點(diǎn)在糖尿病患者和健康對(duì)照中均未檢測到突變。Nampt-3186C>T各基因型及等位基因頻率在中國漢族T2DM患者和健康對(duì)照人群中的分布差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.763，P=-0.987)。瑞格列奈治療后CT基因型患者PINS的升高值明顯低于CC基因型與TT基因型(P=0.022)，CT基因型患者CHO的改變與CC基因型及TT基因型比較差異也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意

5、義(P=0.033)。用瑞格列奈10nM+NMN100μM處理RIN-m5f細(xì)胞48h，與空白對(duì)照及DMSO對(duì)照組相比，胰島素分泌量均顯著增高(P=0.023，P=0.029)，與NMN50μM組比較胰島素分泌量的增高也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.049)。lOμM，50μM和100μM的NMN作用RIN-m5f細(xì)胞36h，PDX-1的mRNA表達(dá)量均上調(diào)(P值分別為0.049，0.006，0.000)，lOOμM劑量組與10μM和50μM劑