積雪草對(duì)TGF-β1誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞MMP-2、TIMP-2表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、　　背景：腎小管間質(zhì)纖維化(renal tubuleinterstitial fibrosis,TIF)是多種原因引起的腎臟疾病進(jìn)展至終末期腎病(end-stage renal disease,ESRD)的共同途徑和主要病理特征。目前認(rèn)為,TIF 的主要特征是細(xì)胞外基質(zhì)(extracelluar matirx,ECM)的合成增加而降解減少,導(dǎo)致 ECM 的大量積聚。在某些病理?xiàng)l件下,腎小管上皮細(xì)胞(renal tubuleinterst

2、itial cells,RTECs)可丟失細(xì)胞表面標(biāo)志物而表現(xiàn)為肌成纖維細(xì)胞(myofibroblast, MyoF)的表型,即發(fā)生腎小管上皮細(xì)胞-肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)分化(tubular epithelial to mesenchymal transdifferentiation,TEMT)。研究表明,MyoF可合成大量ECM,導(dǎo)致ECM積聚。而MMP-2/TIMP-2系統(tǒng)在ECM降解過程中發(fā)揮著重要作用。
　　目的：本實(shí)驗(yàn)研究積

3、雪草顆粒對(duì) TGF-β1 誘導(dǎo)的體外培養(yǎng)的腎小管上皮細(xì)胞MMP-2、TIMP-2mRNA及蛋白表達(dá)的影響,研究積雪草防治TIF的可能機(jī)制,為臨床上應(yīng)用積雪草防治TIF提供理論依據(jù)。
　　方法：以福辛普利(蒙諾)為陽性對(duì)照,將體外培養(yǎng)的大鼠近端腎小管上皮細(xì)胞(NRK52E)隨機(jī)分為6組：①正常對(duì)照組；②TGF-β1誘導(dǎo)組；③TGF-β1+積雪草小劑量組；④TGF-β1+積雪草中劑量組；⑤TGF-β1+積雪草大劑量組；⑥TGF-β

4、1+蒙諾組。培養(yǎng)48h后取出,應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(realtime fluorescence quantitative PCR,RTFQ PCR)技術(shù)和western-blot技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞MMP-2、TIMP-2的mRNA及蛋白表達(dá)。每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次。
　　結(jié)果：①與正常對(duì)照組相比,TGF-β1誘導(dǎo)組細(xì)胞由鋪路石樣上皮細(xì)胞向梭形肌成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)變,積雪草大劑量組細(xì)胞形態(tài)變化不明顯,蒙諾組細(xì)胞形態(tài)變化與積雪草大劑量組相似。與正

5、常對(duì)照組相比,TGF-β1 誘導(dǎo)組 MMP-2、TIMP-2 的mRNA表達(dá)明顯升高(p<0.05)；積雪草大劑量組和蒙諾組細(xì)胞MMP-2、TIMP-2的mRNA與TGF-β1誘導(dǎo)組相比明顯下降(p<0.05),蒙諾組細(xì)胞變化與積雪草大劑量組相似；②與正常對(duì)照組相比,TGF-β1誘導(dǎo)組MMP-2、TIMP-2的蛋白表達(dá)明顯升高(p<0.05)；積雪草大劑量組和蒙諾組細(xì)胞 MMP-2、TIMP-2 的蛋白表達(dá)與TGF-β1誘導(dǎo)組相比明顯下