馬氏珠母貝糖胺聚糖抗腫瘤活性及其機(jī)理研究.pdf

1、目的：在已有的研究基礎(chǔ)上，研究珠母貝糖胺聚糖(GAG)抗L<,1210>白血病作用，探討其在抑制腫瘤血管生成、增強(qiáng)機(jī)體免疫力方面的抗腫瘤作用機(jī)理。 方法：1．雙酶法提取珠母貝GAG粗品(CPG)，DEAE-52-纖維素柱分離純化珠母貝GAG，采用小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn)檢測(cè)CPG的毒性。 2．采用體內(nèi)外實(shí)驗(yàn)法探討珠母貝GAG的抗L<,1210>白血病作用。MTT法檢測(cè)珠母貝GAG粗品(CPG)、純化級(jí)分(GAG-1、GAG-2)

2、體外對(duì)L<,1210>細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制作用，并探討CPG與化療藥順鉑(DDP)合用時(shí)對(duì)L<,1210>細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制效果。建立移植性L<,1210>白血病荷瘤小鼠模型，檢測(cè)CPG對(duì)荷L<,1210>白血病小鼠的生命延長(zhǎng)率及腹圍的影響，并初步探討CPG和環(huán)磷酰胺(CY)的協(xié)同抑瘤作用。 3．以雞胚絨毛尿囊膜(CAM)為模型，檢測(cè)CPG、GAG-1、GAG-2對(duì)CAM血管生成的影響，并探討CPG、GAG-1、GAG-2與5-氟尿嘧啶(

3、5-FU)合用時(shí)對(duì)CAM血管生成的抑制效果，以探討珠母貝GAG抗腫瘤血管生成方面的抗腫瘤作用機(jī)理。 4．檢測(cè)CPG對(duì)正常及免疫抑制小鼠脾指數(shù)、胸腺指數(shù)的影響，CPG、GAG-1、GAG-2體外對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅及產(chǎn)生一氧化氮(NO)能力的影響，CPG、GAG-l、GAG-2體外對(duì)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖能力的影響，探討珠母貝GAG增強(qiáng)機(jī)體免疫力方面的抗腫瘤作用機(jī)理。 結(jié)果：1．本實(shí)驗(yàn)提取純化的珠母貝糖胺聚糖各級(jí)分(C

4、PG、GAG-1、GAG-2)主要技術(shù)指標(biāo)與本實(shí)驗(yàn)室前期研究結(jié)果基本一致，說(shuō)明珠母貝GAG提取純化技術(shù)成熟，結(jié)果穩(wěn)定。急性毒性實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，CPG對(duì)小鼠經(jīng)口的半數(shù)致死量LD<，50>>21.50g/kg，為安全無(wú)毒。 2．CPG、GAG-1、GAG-2體外對(duì)L<,12l0>細(xì)胞生長(zhǎng)均有一定的抑制作用，其中GAG-1效果最好，在250ug/ml劑量下作用24h，抑制率達(dá)51.7％(P<0.01)。CPG和GAG-2抑制效果相當(dāng)，相

5、同條件下，CPG、GAG-2的抑制率分別為31.4％(P<0.01)、23.8％(P<0.05)。CPG與DDP合用能增強(qiáng)DDP對(duì)L<,1210>細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制效果，100ug/ml劑量的CPG與0.1ug/ml劑量的DDP共同作用24h能使DDP的抑制率從11.0％(P<0.05)升高到42.4％(P<0.01)。CPG具有一定的延長(zhǎng)荷L<,1210>白血病小鼠生命的作用，其中100mg/kg劑量組小鼠的生命延長(zhǎng)率為19.3％(P<0

6、.05)。腹圍測(cè)定結(jié)果顯示，CPG不同劑量組的小鼠腹圍均少于生理鹽水對(duì)照組，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其結(jié)果與生命延長(zhǎng)率有一定的相關(guān)性。另外實(shí)驗(yàn)結(jié)果還顯示：30mg/kg劑量的CPG與環(huán)磷酰胺(CY)合用并不能增強(qiáng)CY對(duì)L<,1210>白血病小鼠的生命延長(zhǎng)作用。 3．CPG、GAG-l、GAG-2在實(shí)驗(yàn)所選劑量(0.5ug/ml、5ug/ml、50ug/ml、500ug/ml)下，無(wú)明顯的直接抑制CAM血管生成作用，但CPG、GAG-1、

7、GAG-2在實(shí)驗(yàn)所選 劑量(5ug／ml、50ug／m1)下跟5-FU(2．5ug/m1)合用時(shí)，均能顯著增敏5-FU的抑制CAM血管生成作用(P<0．01)，并呈一定的劑量效應(yīng)關(guān)系，其中GAG-1、GAG-2增敏效果更顯著。 4．CPG完全能對(duì)抗環(huán)磷酰胺(CY)引起的胸腺萎縮，對(duì)正常小鼠的胸腺亦有明顯的增重作用；CPG還能抗CY引起的脾萎縮，對(duì)正常小鼠的脾則無(wú)明顯影響。CPG、GAG-1在體外均能顯著促進(jìn)小鼠腹腔巨噬細(xì)

8、胞吞噬中性紅和產(chǎn)生NO的能力(P<0．01或P<0．05)，且具有劑量效應(yīng)關(guān)系，相同劑量下，CPG對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅和產(chǎn)生NO的能力效果好于GAG-1。GAG-2對(duì)小鼠腹腔巨噬細(xì)胞吞噬中性紅和產(chǎn)生NO的能力無(wú)明顯影響。CPG、GAG-1、GAG-2在體外均能直接促進(jìn)小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖(p<0．01)，并能協(xié)同ConA誘導(dǎo)的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖(p<0．01)。 結(jié)論：珠母貝GAG有一定的抗L<,12l0>白血病作用。珠母