自制三種鎳鉻烤瓷合金的生物相容性評價——體外細(xì)胞毒性實驗研究.pdf

1、目的：本實驗用自制三種鎳鉻烤瓷合金浸提液培養(yǎng)小鼠L929成纖維細(xì)胞，通過MTT法檢測細(xì)胞增殖活力并計算相對增值率，從而對這三種合金的生物相容性進(jìn)行初步檢測，并與口腔科常用的鎳鉻合金，純鈦的生物相容性進(jìn)行比較和評價，以便為該材料的臨床應(yīng)用提供生物學(xué)依據(jù)。結(jié)合國內(nèi)外關(guān)于鎳鉻烤瓷合金的研究成果，研制開發(fā)的這種適合于臨床應(yīng)用的同類產(chǎn)品，進(jìn)一步改善了其結(jié)構(gòu)和性能，為其在國內(nèi)口腔領(lǐng)域中的廣泛應(yīng)用奠定了生物學(xué)基礎(chǔ)。 方法: 一.實驗材

2、料 將實驗試樣分為：A組：1號鋼，B組：2號鋼，C組：3號鋼，D組：純鈦(Ti)，E組：鎳鉻合金(Ni-Cr)，F(xiàn)組：鉛。將A-F組材料分別制成直徑為15mm，高為4mm的扁圓柱體。消毒滅菌后，放入96孔培養(yǎng)板中，用RPMI1640培養(yǎng)液配制材料浸提液。選用傳代的對數(shù)生長期的L-929細(xì)胞，用RPMI1640液配制成密度為1.0×105個/ml的細(xì)胞懸液備用。 二.實驗方法 取96孔培養(yǎng)板，每孔加入細(xì)胞懸液100

3、μl。在1-6組孔中分別加入A-F組的材料浸提液100μl，在第7組孔內(nèi)加入RPMI1640培養(yǎng)液100μl后，放入培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。分別于培養(yǎng)后的1-5天各取一塊培養(yǎng)板，在倒置相差顯微鏡下觀察活細(xì)胞的形態(tài)。在每孔中加入5mg/ml的MTT液20μl，繼續(xù)培養(yǎng)4小時后取出。吸出培養(yǎng)液，在每孔中加入DMS0150μl，用自動酶標(biāo)儀檢測吸光度值。將各組的吸光度值作單因素方差分析和均數(shù)間兩兩比較的統(tǒng)計學(xué)分析。計算各組的細(xì)胞相對增值率(RGR)并作

4、細(xì)胞毒性級評定。 結(jié)果: 一．細(xì)胞的形態(tài)學(xué)觀察 培養(yǎng)24小時，陽性對照組中貼壁生長的細(xì)胞呈梭形或多角形，懸浮的細(xì)胞呈圓形或不規(guī)則形，胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)空泡及顆粒狀物質(zhì)。其余各組的細(xì)胞幾乎全部貼壁生長，形態(tài)正常，胞質(zhì)均勻。培養(yǎng)120小時，陽性對照組中的細(xì)胞大部分脫落，胞質(zhì)，胞核濃縮，甚至可見許多質(zhì)膜崩解，核膜破裂的死亡細(xì)胞。其余各組細(xì)胞大部分繼續(xù)貼壁生長，細(xì)胞密度增加，可見散在的懸浮的退化細(xì)胞及個別的死亡細(xì)胞。 二

5、．統(tǒng)計學(xué)處理結(jié)果 金屬材料組及陰性對照組與陽性對照組之間的吸光度值的差異均有統(tǒng)計學(xué)意義。五種金屬材料組的細(xì)胞相對增殖率由大到小的順序依次為：純鈦，1號鋼，2號鋼，3號鋼，鎳鉻合金。1，2，3號鋼對細(xì)胞均有極輕微的毒性，鎳鉻合金對細(xì)胞表現(xiàn)出1級細(xì)胞毒性，但統(tǒng)計學(xué)分析結(jié)果顯示：五種金屬材料組與陰性對照組的吸光度值之間的差異均無統(tǒng)計學(xué)意義。 結(jié)論: 本實驗證實了1號鋼，2號鋼和3號鋼均具有極微弱的細(xì)胞毒性，但符合材料對