佐劑關(guān)節(jié)炎大鼠肺損傷形態(tài)學(xué)觀察.pdf

1、目的:建立佐劑關(guān)節(jié)炎（Adjuvant arthritis，AA）大鼠模型，觀察AA大鼠肺部病變的形態(tài)學(xué)變化特點(diǎn)，探討AA大鼠肺損傷是否能模擬類風(fēng)濕肺的形態(tài)學(xué)變化，觀察肺部出現(xiàn)肺泡炎和纖維化病變的最佳時(shí)間，并在特定時(shí)間點(diǎn)觀察不同濃度完全弗氏佐劑（Complete freund'sadjuvant，CFA）對(duì)AA大鼠肺損傷的影響，為進(jìn)一步研究類風(fēng)濕肺奠定基礎(chǔ)。
　　方法:
　　實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)與分組:
　　第一部分:觀察AA大鼠

2、肺損傷隨時(shí)間的動(dòng)態(tài)變化:
　　選取清潔級(jí)健康Wistar雄性大鼠48只，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重（170±10）g，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為對(duì)照組（Control組，n=24）和模型組（Model組，n=24）。模型組:大鼠右后足趾皮內(nèi)分別注射0.1ml的CFA，含卡介苗(Bacillus calmette-guerin，BCG)濃度為7.5mg/ml。對(duì)照組:大鼠右后足趾皮內(nèi)注射0.1ml生理鹽水。于造模后第7d、

3、14d、28d、56d放血處死大鼠。
　　第二部分:在第一部分研究的基礎(chǔ)上，選取特定時(shí)間點(diǎn)觀察不同濃度CFA對(duì)AA大鼠肺損傷的影響:
　　選取清潔級(jí)健康Wistar雄性大鼠48只，由河北醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，體重（170±10）g，適應(yīng)性飼養(yǎng)一周后，隨機(jī)分為CFA5mg組、7.5mg組、10mg組和對(duì)照組，造模大鼠右后足趾皮內(nèi)分別注射0.1ml的不同濃度的CFA，對(duì)照組大鼠右后足趾皮內(nèi)注射0.1ml生理鹽水，于造模后第1

4、4d、28d放血處死大鼠。
　　實(shí)驗(yàn)方法:
　　實(shí)驗(yàn)過(guò)程中監(jiān)測(cè)大鼠足爪腫脹度，并對(duì)關(guān)節(jié)炎指數(shù)(Arthritis index，AI)進(jìn)行評(píng)分。處死大鼠同時(shí)收集其血液，酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測(cè)大鼠血清中類風(fēng)濕因子(Rheumatoid factor, RF)含量;摘取大鼠右肺下葉，4％多聚甲醛溶液固定，行HE染色觀察大鼠肺組織形態(tài)學(xué)變化;行Masson膠原染色觀察大鼠肺組織纖維膠原沉積情況;且取左下肺組織堿水解法測(cè)定肺

5、組織羥脯氨酸(Hydroxyproline，HYP)含量;取大鼠繼發(fā)性炎性水腫的踝關(guān)節(jié)，4％多聚甲醛溶液固定，并行脫鈣處理后，HE染色觀察關(guān)節(jié)組織病理學(xué)改變，參考文獻(xiàn)方法行肺組織及關(guān)節(jié)組織病理評(píng)分。應(yīng)用SPSS20.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)每組數(shù)據(jù)進(jìn)行分析。
　　結(jié)果:
　　第一部分:觀察AA大鼠肺損傷隨時(shí)間的動(dòng)態(tài)變化:
　　1模型組大鼠肺泡炎程度均較對(duì)照組各相同時(shí)間點(diǎn)升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，模型組14天肺泡炎程度最高;

6、模型組7天肺纖維化程度較對(duì)照組7天比較無(wú)明顯差異（P＞0.05），14天、28天、56天肺纖維化程度模型組較對(duì)照組相同時(shí)間點(diǎn)嚴(yán)重(P＜0.05)，模型組28天肺纖維化最顯著。
　　2模型組大鼠肺HYP含量隨時(shí)間延長(zhǎng)逐漸升高，至28天達(dá)高峰，模型組均較對(duì)照組各相同時(shí)間點(diǎn)升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　3模型組大鼠血清中RF水平14天明顯升高，28天、56天一直維持較高水平，模型組均較對(duì)照組各相同時(shí)間點(diǎn)升高有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

7、P＜0.05)。
　　4模型組造模足（右足）關(guān)節(jié)腫脹度均較對(duì)照組各相同時(shí)間點(diǎn)腫脹明顯(P＜0.05)，14天時(shí)腫脹最明顯;7天大鼠非造模足（左足）關(guān)節(jié)腫脹度較對(duì)照組7天無(wú)明顯差異(P＞0.05)，14天、28天、56天組均較對(duì)照組相同時(shí)間點(diǎn)腫脹明顯(P＜0.05)，28天達(dá)高峰之后消退;模型組大鼠AI均較對(duì)照組各相同時(shí)間點(diǎn)評(píng)分高(P＜0.05);模型組7天關(guān)節(jié)病理積分較對(duì)照組7天無(wú)明顯變化（P＞0.05），14天、28天、56天組

8、積分高于對(duì)照組相同時(shí)間點(diǎn)有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，56天病理積分最高。
　　第二部分:觀察不同濃度CFA對(duì)AA大鼠肺損傷的影響:
　　114天造模大鼠肺組織肺泡炎程度均較對(duì)照組明顯(P＜0.05)，7.5mg、10mg組肺泡炎程度較5mg組嚴(yán)重(P＜0.05)，但兩組之間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。28天造模大鼠肺纖維化程度較對(duì)照組嚴(yán)重(P＜0.05)，7.5mg、10mg組肺纖維化程度較5mg組嚴(yán)重(P＜0.05)，但

9、兩組之間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　214天、28天造模大鼠肺組織HYP含量均較對(duì)照組相同時(shí)間點(diǎn)升高（P＜0.05），7.5mg、10mg組含量高于5mg組（P＜0.05），但兩組之間無(wú)明顯差異(P＞0.05)。
　　314天、28天大鼠血清中RF水平均較對(duì)照組相同時(shí)間點(diǎn)升高(P＜0.05)，7.5mg、10mg組RF水平高于5mg組(P＜0.05)，但兩組之間無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　414天造模大鼠7

10、.5mg、10mg組大鼠關(guān)節(jié)腫脹度較對(duì)照組和5mg組腫脹明顯(P＜0.05)，但7.5mg、10mg組之間無(wú)差異;造模大鼠AI，關(guān)節(jié)病理積分均較對(duì)照組評(píng)分高(P＜0.05)，7.5mg、10mg組較5mg組AI評(píng)分高(P＜0.05)，但兩者之間無(wú)差異。28天造模大鼠關(guān)節(jié)腫脹度均較對(duì)照組腫脹明顯(P＜0.05)，7.5mg、10mg組較5mg組腫脹明顯(P＜0.05)，但兩者之間無(wú)差異;造模大鼠7.5mg、10mg組AI評(píng)分高于對(duì)照組和5

11、mg組(P＜0.05)，但7.5mg、10mg組之間無(wú)差異;造模大鼠7.5mg、10mg組病理積分高于對(duì)照組(P＜0.05)，10mg組積分高于5mg組(P＜0.05)，5mg、7.5mg組比較無(wú)明顯差異（P＞0.05）。
　　結(jié)論:
　　1 AA大鼠模型可觀察到隨時(shí)間變化的肺部形態(tài)學(xué)動(dòng)態(tài)改變，造模后14天炎性病變顯著，可見(jiàn)肺泡間隔明顯增厚，肺泡上皮壞死，肺泡水腫變形，肺間質(zhì)內(nèi)細(xì)胞浸潤(rùn)顯著，成纖維細(xì)胞增多。28天時(shí)病變以纖維