大鼠DVT-PTE模型的建立及VEGF的變化.pdf

1、靜脈血栓栓塞癥(venousthromboembolism，VTE)包括肺血栓栓塞癥(pulmonarythromboembolism，PTE)和深靜脈血栓形成(deepvenousthrombosis，DVT)。PTE患者約70﹪可發(fā)現(xiàn)DVT的證據(jù)。DVT患者約30﹪發(fā)生無(wú)癥狀或隱形的PTE。一些細(xì)胞因子參與VTE發(fā)病過(guò)程已受到廣泛重視。血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(Vascularendothelialgrowthfactor，VEGF)具有誘

2、導(dǎo)血管生成及增加微血管通透性的生物活性，并可能在血栓溶解過(guò)程起一定作用。本文旨在建立模擬臨床VTE的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型，制作不同階段DVT栓子的PTE模型，研究PTE肺組織的VEGF變化。 目的：建立大鼠VTE模型，觀察不同階段DVT栓子制作的PTE的病理和VEGF變化。 方法：1)Sprague-Dawley大鼠144只，雌雄各半，隨機(jī)分為DVT組(18只)、DVT-PTE組(54只)和假手術(shù)(Sham)組(72只)。DVT

3、組依據(jù)血栓形成持續(xù)時(shí)間(1天、4天、7天)不同分為DVT1、DVT4、DVT7三組，每組6只；DVT-PTE組依據(jù)DVT時(shí)間(1天、4天、7天)不同和肺血栓栓塞后時(shí)間(1天、4天、7天)不同分為DVT1-PTE1、DVT1-PTE4、DVT1-PTE7、DVT4-PTE1、DVT4-PTE4、DVT4-PTE7、DVT7-PTE1、DVT7-PTE4、DVT7-PTE7九組，(簡(jiǎn)稱(chēng)D1P1、D1P4、D1P7、D4P1、D4P4、D4P

4、7、D7P1、D7P4、D7P7)，每組6只。Sham組依據(jù)上述相應(yīng)時(shí)間分為十二組，每組6只。手術(shù)阻滯實(shí)驗(yàn)組大鼠的左股靜脈形成DVT，DVT造模成功后依據(jù)上述不同時(shí)間段取出股靜脈栓子于右股靜脈注入制成PTE模型。2)測(cè)定各組動(dòng)脈血?dú)狻?)血栓及肺組織切片HE染色觀察血栓及肺組織不同時(shí)間變化，4)采用免疫組織化學(xué)檢測(cè)肺組織VEGF表達(dá)部位，Western-blot、RT-PCR方法檢測(cè)VEGF蛋白及mRNA的表達(dá)。5)應(yīng)用計(jì)量資料以mea

5、n±SD表示，組間比較采用多因素方差分析和非參數(shù)檢驗(yàn)，并行相關(guān)和交互作用分析，P＜0.05為差異有顯著性。 結(jié)果：1.DVT組18只大鼠模型成功率100﹪，術(shù)后無(wú)死亡。DVT-PTE組術(shù)后D1P1組12小時(shí)死亡1只，解剖證實(shí)死亡原因?yàn)榇竺娣ePTE。DVT術(shù)后1天患肢腫脹發(fā)生率21﹪，2-3天自行緩解。DVT后7天左下肢股靜脈血管鞘周?chē)袑訝?、厚度約1m的纖維板樣組織。2.DVT-PTE組PTE后均出現(xiàn)呼吸急促、心率加快。D4P4

6、、D4P7、D7P1、D7P4和D7P7組PaO2降低，與sham組比較差異有顯著性。3.免疫組化結(jié)果Sham組支氣管上皮細(xì)胞可見(jiàn)VEGF表達(dá)，DVT-PTE后1天肺泡上皮可見(jiàn)VEGF表達(dá)，第4天肺動(dòng)脈內(nèi)皮可見(jiàn)VEGF表達(dá)。DVT4-7天的栓子栓塞肺動(dòng)脈后可見(jiàn)機(jī)化的栓子有VEGF表達(dá)。DVT-PTE后肺組織VEGFmRNA及蛋白表達(dá)在第1天即升高，并達(dá)峰值(P＜0.05)，第4-7天仍升高，但蛋白表達(dá)第7天與Sham組比較差異不顯著(P

7、＞0.05)，DVT組肺組織VEGFmRNA及蛋白表達(dá)量與Sham組比較差異無(wú)顯著性(P＞0.05)。 結(jié)論：1.血管夾阻斷一側(cè)股靜脈血流成功建立DVT模型，再經(jīng)另一側(cè)股靜脈注入自體血栓可制成理想的DVT-PTE模型，是符合VTE病理生理的理想模型。2.DVT不同時(shí)期血栓栓子的性質(zhì)可直接影響PTE血栓的轉(zhuǎn)歸(溶解、機(jī)化、再通或繼發(fā)血栓形成)和低氧血癥的程度；影響肺組織的病理改變。3.PTE后肺組織中VEGF表達(dá)增加。VEGF與纖