跨損傷DNA合成通路基因REV3L在宮頸癌細胞化療增敏中的作用及其機制研究.pdf

1、目的REV3L是DNA聚合酶ζ(PoIζ)的催化亞基，在跨損傷DNA合成通路(TLS)中起關(guān)鍵作用。本課題旨在研究REV3L基因?qū)m頸癌細胞化療敏感性的影響，探討REV3L基因在宮頸癌中作為分子靶點的價值。
　　方法采用免疫組化法檢測123例宮頸癌組織及17例正常宮頸組織中PoIζ蛋白的表達水平。構(gòu)建REV3L基因過表達載體pcDNA-REV3L后導入REV3L低表達的宮頸癌細胞系，構(gòu)建REV3L基因干擾載體shRNA-REV3L

2、并轉(zhuǎn)染REV3L高表達宮頸癌細胞系后，通過CCK-8法檢測對細胞增殖、流式細胞儀檢測細胞周期變化、平板克隆形成實驗檢測克隆形成率的變化，進一步通過CCK-8法檢測REV3L基因?qū)︺K類藥物耐受性的影響，通過流式細胞術(shù)檢測藥物作用后細胞凋亡情況，并通過蛋白免疫印跡法檢測凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2、Bcl-xl及Bax等的變化情況。通過免疫熒光法檢測順鉑處理后REV3L基因?qū)Ζ?H2AX焦點形成情況的影響，蛋白免疫印跡法檢測γ-H2AX等蛋白的變

3、化。
　　結(jié)果宮頸癌組織中PoIζ蛋白表達水平較正常宮頸組織高(P＜0.05)。REV3L基因沉默后宮頸癌細胞株增殖減慢，REV3L基因過表達后宮頸癌細胞株增殖加快;沉默REV3L基因通過G1/S期阻滯抑制細胞周期進展，而REV3L基因過表達后可以越過G1/S期細胞周期檢查點促進細胞周期進展;REV3L基因沉默后細胞平板克隆形成率減少，而過表達后細胞克隆形成率增加。下調(diào)宮頸癌細胞系REV3L基因表達后CCK-8檢測示宮頸癌細胞對順

4、鉑的敏感性增加;流式細胞儀檢測順鉑作用后早期凋亡率增加;Western blot檢測促凋亡蛋白升高，而抗凋亡蛋白降低;免疫熒光檢測細胞內(nèi)γ-H2AX焦點形成增多，Western blot檢測γ-H2AX蛋白表達升高。REV3L基因過表達后CCK-8示細胞對順鉑的抵抗性增加;流式細胞儀檢測順鉑作用后早期凋亡率降低;Western blot檢測促凋亡蛋白降低，而抗凋亡蛋白升高;免疫熒光檢測細胞內(nèi)γ-H2AX焦點形成減少，Westernblo