腹股溝皮下注射免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎及治療前后鼻黏膜microRNA的變化研究.pdf

1、本文對腹股溝皮下注射免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎及治療前后鼻黏膜microRNA的變化進(jìn)行了研究。本研究分為兩個(gè)部分：
　　第一部分：腹股溝皮下注射法免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎的實(shí)驗(yàn)研究。
　　目的：探討腹股溝皮下注射法免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎的可行性。
　　方法：36只雌性BALB/c小鼠，6～8周齡，隨機(jī)分為6組，每組6只，包括A空白組、A模型組、A治療組、B空白組、B模型組和B治療組（A為腹股溝皮下注射，B為頸背部皮下注射）

2、。卵清蛋白(ovalbumin，OVA)AR模型建立成功后治療組用OVA進(jìn)行免疫治療，隔天一次，共15次。鼻腔連續(xù)激發(fā)第七天時(shí)，進(jìn)行小鼠AR癥狀評(píng)分，鼻黏膜變色酸2R染色統(tǒng)計(jì)鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophils，EOS)數(shù)，ELISA法檢測血清OVA-sIgE表達(dá)和鼻腔灌洗液中IL-4和IFN-γ表達(dá)，計(jì)算IFN-γ與IL-4比值。以SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
　　結(jié)果：治療前，模型組和治療組AR癥狀評(píng)分均大于5，治

3、療后，A治療組AR癥狀評(píng)分小于5。A空白組、A模型組、A治療組、B空白組、B模型組和B治療組EOS數(shù)分別為0.78±0.31、21.60±2.90、10.43±2.56、0.83±0.46、22.44±3.39和23.40±4.24，A治療組EOS數(shù)較A模型組明顯減少，差異具有顯著性（t=7.08，P＜0.05），B治療組EOS數(shù)與B模型組比較，差異無顯著性（t=0.71，P＞0.05）;空白組OVA-sIgE的表達(dá)為陰性，其余組為陽性

4、;各組IFN-γ與IL-4比值分別為10.75±3.38、10.38±3.08、3.02±0.69、2.71±0.89、2.52±0.30和5.45±1.41，A治療組IFN-γ與IL-4比值較A模型組明顯升高，差異具有顯著性意義(t=5.08 P＜0.05)，B治療組IFN-γ與IL-4比值與B模型組比較，差異無顯著性（t=1.60，P＞0.05）。
　　結(jié)論：腹股溝皮下注射免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎效果好，周期短，操作簡單，可行性

5、好，是特異性免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎的一種新方法。
　　第二部分：變應(yīng)性鼻炎特異性免疫治療前后鼻黏膜microRNA的變化研究。
　　目的：研究microRNA在變應(yīng)性鼻炎特異性免疫治療前后表達(dá)的變化。
　　方法：雌性BALB/c小鼠，6～8周齡，隨機(jī)分為對照組、模型組和治療組。采用卵清蛋白腹腔注射及滴鼻法建立AR小鼠模型，以腹股溝皮下注射法進(jìn)行SIT，以疊加法進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分，鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù)，酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測

6、血清中特異性O(shè)VA-slgE的表達(dá)及鼻腔灌洗液中IFN-γ與IL-4的表達(dá)。3組小鼠分別用microRNA基因芯片進(jìn)行初步篩查，篩查治療組與模型組相比Fold change≥2.0且P＜0.05的microRNA，而后用GeneSpring12.5軟件進(jìn)行靶基因預(yù)測并與免疫反應(yīng)和炎癥相關(guān)通路中的mRNA取交集。用MEV_4_6_0軟件做聚類分析圖、Cytoscape_v2.8.2做靶基因網(wǎng)絡(luò)圖。
　　結(jié)果：AR小鼠模型及SIT成功

7、。治療組與模型組相比有9個(gè)microRNA表達(dá)下調(diào)，6個(gè)microRNA表達(dá)上調(diào)。聚類分析可明顯看出治療組和模型組分別聚在兩個(gè)分支。這15個(gè)microRNA的靶基因有5753個(gè)，取交集后得到451個(gè)與SIT相關(guān)性更大的靶基因。從網(wǎng)絡(luò)圖看出，一個(gè)microRNA可以調(diào)控多個(gè)靶基因，一個(gè)基因也可以受多個(gè)microRNA的調(diào)控，它們相互作用可能參與了SIT的機(jī)制。
　　結(jié)論：鼻黏膜microRNA的表達(dá)在AR的SIT前后發(fā)生了變化，mi