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文檔簡介
1、本文對腹股溝皮下注射免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎及治療前后鼻黏膜microRNA的變化進(jìn)行了研究。本研究分為兩個(gè)部分:
第一部分:腹股溝皮下注射法免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎的實(shí)驗(yàn)研究。
目的:探討腹股溝皮下注射法免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎的可行性。
方法:36只雌性BALB/c小鼠,6~8周齡,隨機(jī)分為6組,每組6只,包括A空白組、A模型組、A治療組、B空白組、B模型組和B治療組(A為腹股溝皮下注射,B為頸背部皮下注射)
2、。卵清蛋白(ovalbumin,OVA)AR模型建立成功后治療組用OVA進(jìn)行免疫治療,隔天一次,共15次。鼻腔連續(xù)激發(fā)第七天時(shí),進(jìn)行小鼠AR癥狀評(píng)分,鼻黏膜變色酸2R染色統(tǒng)計(jì)鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞(eosinophils,EOS)數(shù),ELISA法檢測血清OVA-sIgE表達(dá)和鼻腔灌洗液中IL-4和IFN-γ表達(dá),計(jì)算IFN-γ與IL-4比值。以SPSS17.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。
結(jié)果:治療前,模型組和治療組AR癥狀評(píng)分均大于5,治
3、療后,A治療組AR癥狀評(píng)分小于5。A空白組、A模型組、A治療組、B空白組、B模型組和B治療組EOS數(shù)分別為0.78±0.31、21.60±2.90、10.43±2.56、0.83±0.46、22.44±3.39和23.40±4.24,A治療組EOS數(shù)較A模型組明顯減少,差異具有顯著性(t=7.08,P<0.05),B治療組EOS數(shù)與B模型組比較,差異無顯著性(t=0.71,P>0.05);空白組OVA-sIgE的表達(dá)為陰性,其余組為陽性
4、;各組IFN-γ與IL-4比值分別為10.75±3.38、10.38±3.08、3.02±0.69、2.71±0.89、2.52±0.30和5.45±1.41,A治療組IFN-γ與IL-4比值較A模型組明顯升高,差異具有顯著性意義(t=5.08 P<0.05),B治療組IFN-γ與IL-4比值與B模型組比較,差異無顯著性(t=1.60,P>0.05)。
結(jié)論:腹股溝皮下注射免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎效果好,周期短,操作簡單,可行性
5、好,是特異性免疫治療小鼠變應(yīng)性鼻炎的一種新方法。
第二部分:變應(yīng)性鼻炎特異性免疫治療前后鼻黏膜microRNA的變化研究。
目的:研究microRNA在變應(yīng)性鼻炎特異性免疫治療前后表達(dá)的變化。
方法:雌性BALB/c小鼠,6~8周齡,隨機(jī)分為對照組、模型組和治療組。采用卵清蛋白腹腔注射及滴鼻法建立AR小鼠模型,以腹股溝皮下注射法進(jìn)行SIT,以疊加法進(jìn)行行為學(xué)評(píng)分,鼻黏膜嗜酸性粒細(xì)胞計(jì)數(shù),酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)檢測
6、血清中特異性O(shè)VA-slgE的表達(dá)及鼻腔灌洗液中IFN-γ與IL-4的表達(dá)。3組小鼠分別用microRNA基因芯片進(jìn)行初步篩查,篩查治療組與模型組相比Fold change≥2.0且P<0.05的microRNA,而后用GeneSpring12.5軟件進(jìn)行靶基因預(yù)測并與免疫反應(yīng)和炎癥相關(guān)通路中的mRNA取交集。用MEV_4_6_0軟件做聚類分析圖、Cytoscape_v2.8.2做靶基因網(wǎng)絡(luò)圖。
結(jié)果:AR小鼠模型及SIT成功
7、。治療組與模型組相比有9個(gè)microRNA表達(dá)下調(diào),6個(gè)microRNA表達(dá)上調(diào)。聚類分析可明顯看出治療組和模型組分別聚在兩個(gè)分支。這15個(gè)microRNA的靶基因有5753個(gè),取交集后得到451個(gè)與SIT相關(guān)性更大的靶基因。從網(wǎng)絡(luò)圖看出,一個(gè)microRNA可以調(diào)控多個(gè)靶基因,一個(gè)基因也可以受多個(gè)microRNA的調(diào)控,它們相互作用可能參與了SIT的機(jī)制。
結(jié)論:鼻黏膜microRNA的表達(dá)在AR的SIT前后發(fā)生了變化,mi
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