L-NAME對隱睪下降固定術(shù)后生精細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：研究隱睪下降固定術(shù)后eNOS和iNOS的表達(dá)及NOS抑制劑N-硝基-L-精氨酸甲酯（L-NAME）對隱睪下降固定術(shù)后生精細(xì)胞凋亡的影響。 方法：75只健康雄性SD大鼠(22 day-old)隨機(jī)分為隱睪組（60只）和假手術(shù)組（15只）。建立單側(cè)隱睪模型，模型建立按文獻(xiàn)操作[1] ：戊巴比妥鈉(40mg/Kg)腹腔內(nèi)注射麻醉，下腹正中切口，隱睪組大鼠切斷右側(cè)睪丸引帶，用7-0無創(chuàng)傷線將右側(cè)睪丸固定于腹后壁關(guān)腹，假手術(shù)組右側(cè)睪

2、丸切斷引帶后還納入陰囊關(guān)腹。術(shù)后12天將隱睪組大鼠隨機(jī)分為隱睪組（不作處理）、隱睪固定組、隱睪固定+生理鹽水組、隱睪固定+L-NAME組，每組15只大鼠。隱睪下降固定模型建立按文獻(xiàn)操作[2] ：戊巴比妥鈉(40mg/Kg)腹腔內(nèi)注射麻醉，下腹正中切口和陰囊橫行切口，將睪丸游離后還至陰囊，用7-0無創(chuàng)傷線將睪丸固定于陰囊肉膜上。術(shù)后分別于腹腔內(nèi)注射生理鹽水或L-NAME，每天一次，定時定量(50mg/Kg)。假手術(shù)組將右側(cè)睪丸牽拉入腹腔再

3、還至陰囊。術(shù)后第12天于腹腔內(nèi)給藥后2小時大鼠尾部采血，取血清于-80℃凍存,硝酸還原酶法測定血清NO含量，化學(xué)比色法測血清NOS活性。術(shù)后第24天脫頸椎處死大鼠，留取各組大鼠雙側(cè)睪丸稱濕重，常規(guī)組織學(xué)切片觀察各組右側(cè)睪丸生精上皮形態(tài)，TUNEL原位末端標(biāo)記法結(jié)合流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測各組右側(cè)睪丸生精細(xì)胞凋亡，Western blot和免疫組化分別檢測eNOS、iNOS 蛋白表達(dá)的變化。 結(jié)果：各組大鼠左側(cè)睪丸及假手術(shù)組右側(cè)與

4、左側(cè)睪丸之間重量無明顯差異，其余各組右側(cè)睪丸重量均輕于左側(cè)睪丸；隱睪組右側(cè)睪丸重量明顯輕于其它各組右側(cè)睪丸；隱睪固定+L-NAME組右側(cè)睪丸重量大于隱睪固定組、隱睪固定+生理鹽水組及隱睪組右側(cè)睪丸。隱睪固定組、隱睪固定+生理鹽水組之間各檢測指標(biāo)無顯著性差別。隱睪組血清NO含量和NOS活性均高于其它各組,隱睪固定組和隱睪固定+生理鹽水組血清NO含量和NOS活性高于假手術(shù)組和隱睪固定+L-NAME組。亞倍體生精細(xì)胞百分比和凋亡指數(shù)在隱睪組最

5、高，隱睪固定組及隱睪固定+生理鹽水組次之，隱睪固定+L-NAME組更低，假手術(shù)組最低，差別均有顯著性意義。Western blot顯示假手術(shù)組睪丸eNOS和iNOS 蛋白含量最低，隱睪固定和隱睪固定+生理鹽水組與隱睪固定+L-NAME組差別無顯著性意義。免疫組化顯示假手術(shù)組睪丸生精上皮內(nèi)有eNOS和iNOS弱表達(dá)，其余各組隱睪固定側(cè)生精上皮內(nèi)均有較強(qiáng)的eNOS和iNOS表達(dá)，間質(zhì)有較強(qiáng)的eNOS和iNOS表達(dá)，而血管只有eNOS的強(qiáng)表達(dá)