多聚左旋精氨酸對NCI-H292細胞炎癥介質(zhì)調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、目的:
　　研究 NCI-H292細胞在多聚左旋精氨酸（Poly-L-arginine)聯(lián)合脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)作用于下白介素-6(interleukin-6,IL-6)、IL-8、IL-13、嗜酸性粒細胞趨化因子(Eotaxin)的表達水平,以及肝素和L-單甲基-精氨酸(L-NG-monomethyl-arginine,L-NMMA)對其細胞因子表達的影響。
　　方法:
　　1.細胞

2、培養(yǎng)及哮喘微環(huán)境模型的建立
　　將NCI-H292細胞培養(yǎng)在含10％胎牛血清的常規(guī)培養(yǎng)基中,每周傳代兩次;選擇生長狀態(tài)良好的細胞以3×105/500μl密度接種于24孔培養(yǎng)板中,用LPS預(yù)先將氣道上皮細胞激活,模擬哮喘氣道上皮細胞模型。
　　2.細胞因子水平的測定
　　按照實驗設(shè)計分為空白對照組(培養(yǎng)液)、LPS組(5μg/ml)、多聚左旋精氨酸組(Max=40μg/ml)、LPS+poly-L-arginine組、L

3、PS+poly-L-arginine+肝素(100u/L)組、LPS+poly-L-arginine+L-NMMA(Max=0.8mM)組,并依照分組要求加入不同濃度的多聚左旋精氨酸、LPS、肝素、L-NMMA;共培養(yǎng)20小時,收集細胞上清液。按照試劑盒說明采用ELISA法檢測各組IL-6、IL-8、IL-13、Eotaxin的表達水平,并比較各組間的差異。
　　3.統(tǒng)計學(xué)處理
　　實驗數(shù)據(jù)采用SPSS16.0統(tǒng)計分析軟件分

4、析,數(shù)據(jù)以x±s表示。多組間比較采用單因素方差分析(one-way ANOVA);兩兩比較時方差齊時采用LSD檢驗,方差不齊時采用Dunnett’s T3檢驗。P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　結(jié)果:
　　1.在多聚左旋精氨酸作用下,IL-6、IL-8、Eotaxin的表達水平明顯增高,且在多聚左旋精氨酸為5μg/ml時,IL-6、IL8的表達水平最高;在多聚左旋精氨酸為20μg/ml時,Eotaxin的表達水平最高;但

5、各濃度之間的差異無統(tǒng)計學(xué)意義;而單獨 LPS組、多聚左旋精氨酸組與對照組比較,IL-6、IL-8、Eotaxin的水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.在多聚左旋精氨酸作用下,IL-13的表達未見明顯改變;各組IL-13的水平差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.將多聚左旋精氨酸、LPS及肝素共同作用NCI-H292細胞時,IL-6、IL-8、Eotaxin的表達水平明顯低于LPS+poly-L-argini

6、ne組(P<0.05)。
　　4.將多聚左旋精氨酸、LPS及 L-NMMA共同作用 NCI-H292細胞時,L-NMMA對各組IL-6、IL-8的表達無影響(P>0.05)。
　　結(jié)論:
　　1.多聚左旋精氨酸能夠促進LPS誘導(dǎo)的NCI-H292細胞IL-6、IL-8、Eotaxin的表達水平,但對IL-13的表達水平?jīng)]有影響。
　　2.肝素能夠抑制多聚左旋精氨酸聯(lián)合LPS誘導(dǎo)的NCI-H292細胞IL-6、IL