BMI-1在骨肉瘤中的表達及功能研究.pdf

1、骨肉瘤是最常見的原發(fā)性惡性骨腫瘤，來源于間葉組織，可發(fā)生于任何年齡，尤其好發(fā)于青少年，預后差。骨肉瘤惡性程度及轉移率高，其遠處轉移是大多數(shù)骨肉瘤患者治療失敗和死亡的最主要原因。從目前情況來看，雖然5年生存率已經(jīng)達到65-75％，但在診斷、治療和預后等方面仍存在不足。為此，發(fā)現(xiàn)并建立新的、有效的骨肉瘤的診治措施勢在必行，探索早期診斷、預后評判標準和開發(fā)新的治療藥物（非化療藥）是當前骨肉瘤臨床診治中熱門的研究方向。文獻表明，BMI-1基因在

2、腫瘤方面的研究證據(jù)非常豐富。但目前國內(nèi)、外對于該基因與骨腫瘤的相關性研究卻較為缺乏，因此我們將研究重點鎖定在BMI-1與骨肉瘤之間的相關性研究上。
　　 目的：構建人BMI-1基因相關shRNA慢病毒載體，包裝成病毒顆粒后感染骨肉瘤細胞株后，觀察抑制BMI-1表達水平對腫瘤細胞增殖、侵襲能力、細胞周期以及對化療藥物敏感性的影響。并通過回顧性研究探討B(tài)MI-1在骨肉瘤細胞中的表達及其與臨床病理及預后的關系。
　　 方法：用

3、慢病毒介導的BMI-1shRNA轉染入骨肉瘤細胞株SAOS-2和U20S，并通過Real-timePCR和WesternBlot檢測轉染后BMI-1的表達情況。運用MMT實驗、PI-FACS實驗、平板克隆實驗、Tanswell細胞侵襲實驗、流式雙染實驗對轉染后的人骨肉瘤細胞株的惡性表型進行檢測。同時對北京協(xié)和醫(yī)院的16例骨肉瘤、9例軟骨肉瘤、11例骨軟骨瘤、2例尤文氏肉瘤進行免疫組化實驗，臨床驗證BMI-1與骨肉瘤的關系。
　　

4、 結果：慢病毒介導的RNAi持續(xù)的、顯著的降低了BMI—1表達。在體外實驗中，下調BMI-1表達顯著影響了人骨肉瘤細胞的惡性表型，降低了增殖能力、侵襲能力，增加了對于順鉑化療的敏感性，但對于細胞周期無顯著性影響，并通過回復對照實驗證實該基因的特異性，同時發(fā)現(xiàn)BMI-1RNAi對腫瘤細胞的增殖、侵襲抑制作用及增加腫瘤細胞對順鉑化療敏感性具有一定的細胞特異性。臨床病例研究證實BMI-1存在于骨肉瘤(12/16)、骨軟骨瘤(1/11)，軟骨肉

5、瘤(6/9)、尤文氏肉瘤(1/2)中，但在非腫瘤骨組織中沒有表達(0/10)。骨肉瘤中BMI-1陽性表達率顯著高于骨軟骨瘤及非腫瘤骨組織(P<0.05)。惡性骨腫瘤中BMI-1陽性表達率顯著高于良性骨腫瘤(P<0.05)。BMI-1陽性表達情況與骨肉瘤病例組臨床病理特點無顯著性關聯(lián)。在單因素生存分析中，除術前是否轉移與病例生存期存在顯著關聯(lián)(P<0.05)外，余項目均無顯著關聯(lián)。在Cox比例風險回歸模型中，所有結果均無顯著性。但根據(jù)相對

6、危險度來看，病理分級、Enneking外科分期、術后轉移復發(fā)、BMI-1表達情況四項對于骨肉瘤病人的預后存在一定影響。
　　 結論：構建了干擾BMI-1的慢病毒體系，感染入骨肉瘤細胞系SAOS-2和U20S，經(jīng)Real-timePCR以及WesternBlot檢測，能有效干擾BMI-1的表達，為骨肉瘤細胞功能研究打下堅實的基礎。
　　 體外實驗結果顯示：干擾BMI-1后能顯著抑制人骨肉瘤細胞的增殖、侵襲能力，并提高其對于

7、順鉑的敏感性，提示BMI-1在骨肉瘤的發(fā)生發(fā)展中作用顯著，為骨肉瘤分子靶向治療開辟了一個嶄新的方向，其很可能成為骨肉瘤分子治療的靶點之一。
　　 運用免疫組化方法證實了BMI-1蛋白在骨腫瘤組織（包括骨軟骨瘤、骨肉瘤、軟骨肉瘤、尤文氏肉瘤）中的表達，并且證明BMI-1蛋白在惡性骨腫瘤中的表達率明顯高于良性骨腫瘤。研究提示BMI-1很可能會成為骨肉瘤等惡性骨腫瘤的診斷指標之一。
　　 BMI-1基因的表達與臨床分期、病理分

8、級、年齡、性別、腫瘤部位、術前轉移、軟組織浸潤等因素無顯著性關聯(lián)。研究提示需進一步研究證實，更深層次挖掘BMl-l與骨肉瘤患者臨床病理特點的相關性及規(guī)律。
　　 骨肉瘤病人生存因素分析提示病人術后生存期與術前是否轉移存在統(tǒng)計學意義，Cox回歸模型提示病理分級、Enneking外科分期、術后轉移復發(fā)、BMI-1表達情況四項對于骨肉瘤病人的生存期存在一定影響。研究提示需要進一步研究來分析骨肉瘤患者的預后影響因素，并驗證BMI-1是否