酶酚酸酯治療實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎大鼠的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究目的： 研究酶酚酸酯(mycophenolate mofetil，MMF)對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis，EAE)大鼠的神經(jīng)功能恢復(fù)、腦脊髓組織病理變化、血T淋巴細(xì)胞亞群比例的影響及作用機(jī)制，為MMF治療多發(fā)性硬化(multiple sclerosis，MS)的進(jìn)一步研究提供依據(jù)。 研究方法： (1)制作實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型：健康雌性Wi

2、star大鼠50只，隨機(jī)取6只作為正常對(duì)照組，其余44只進(jìn)行造模。用雌性豚鼠全脊髓勻漿和完全弗氏佐劑制成的完全抗原免疫Wistar大鼠制作EAE大鼠模型，以生理鹽水和完全弗氏佐劑注射的Wistar大鼠作為對(duì)照。 (2)動(dòng)物模型鑒定：免疫當(dāng)日和免疫后所有動(dòng)物每日進(jìn)行神經(jīng)功能評(píng)分(Duckers評(píng)分)直至造模成功。 (3)造模成功后大鼠隨機(jī)分為五組：MMF大劑量組：30mg/(Kg-d)灌胃給藥；MMF小劑量組：20mg/(

3、Kg.d)灌胃給藥；甲基強(qiáng)的松龍組：30mg/(Kg.d)尾靜脈注射給藥；模型組：等量生理鹽水灌胃；對(duì)照組：等量生理鹽水灌胃。給藥時(shí)間均為14d，每天觀察記錄神經(jīng)功能評(píng)分及體重變化。 (4)14d后心臟灌注處死大鼠，HE染色觀察腦脊髓組織病理變化，神經(jīng)髓鞘染色觀察腦脊髓中神經(jīng)髓鞘脫失情況，流式細(xì)胞術(shù)(Flow cytometry,FC)觀察血CD4+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、CD8+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、CD4+/CD8+比值、CD4+CD

4、25+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及CD4+CD45RA+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。 (5)采用SPSS13.0軟件行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理，各組數(shù)據(jù)以x±s表示，采用方差分析，P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)果： 1.造模成功率及神經(jīng)功能評(píng)分造模成功的大鼠為32只，造模成功率為72.1％，至分組時(shí)存活的EAE大鼠為25只。與對(duì)照組相比，各組EAE大鼠神經(jīng)功能評(píng)分明顯增加，體重明顯下降(P(0.01)；與模型組相比，用MMF和甲基強(qiáng)的松龍

5、治療后大鼠神經(jīng)功能評(píng)分有所下降，體重增加，且大劑量MMF療效優(yōu)于小劑量MMF及甲基強(qiáng)的松龍(P<0.01)。 2.HE染色和神經(jīng)髓鞘染色觀察腦脊髓組織病理變化造模成功后HE染色可見EAE大鼠腦脊髓組織病理學(xué)變化主要表現(xiàn)為血管周圍有大量炎細(xì)胞浸潤，形成“血管套”樣改變，治療后各組EAE大鼠腦脊髓組織病理表現(xiàn)有不同程度的減輕，且MMF大劑量組減輕較明顯；神經(jīng)髓鞘染色可見EAE大鼠大腦白質(zhì)和脊髓內(nèi)神經(jīng)髓鞘脫失，治療后各組EAE大鼠腦脊

6、髓組織髓鞘脫失程度減輕，且MMF大劑量組變化較明顯。 3.流式細(xì)胞術(shù)觀察CD4+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、CD8+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)、CD4+/CD8+比值、CD4+cD25+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)及CD4+CD45RA+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)。 與模型組相比，治療后EAE大鼠血CD4+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)減少，CD8+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)增加，CD4+/CD8+比值降低，CD4+CD25+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)增加，CD4+D45RA+T淋巴細(xì)胞百分?jǐn)?shù)增