STAT1和Survivin及相關(guān)蛋白在胃癌中相關(guān)性的研究及其臨床意義.pdf

1、目的：胃癌是我國(guó)的常見惡性腫瘤之一。胃癌存在細(xì)胞凋亡明顯受阻現(xiàn)象。Survivin是IAP家族的成員，具有較強(qiáng)抑制凋亡功能。Survivin在胎兒組織中大量表達(dá)，然而在正常的分化成熟的組織中無(wú)表達(dá)。Survivin同時(shí)也在大量惡性腫瘤組織中過(guò)度表達(dá)。 淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移是胃癌預(yù)后中重要指標(biāo)，而胃癌手術(shù)標(biāo)本的淋巴結(jié)檢查數(shù)量不足將影響淋巴結(jié)檢查結(jié)果的準(zhǔn)確性。AJCC/UICC推薦胃癌淋巴結(jié)檢查數(shù)應(yīng)≥15枚。 本研究并首次提出STAT

2、1和Survivin存在相關(guān)性的推測(cè)，擬通過(guò)通過(guò)組織芯片和免疫組織化學(xué)的方法，首次在有完整淋巴結(jié)檢查數(shù)據(jù)和有完整臨床病理學(xué)檢查資料的胃腺癌組織中，觀察STAT1和Survivin及其相關(guān)蛋白在人胃腺癌組織中表達(dá)的情況，研究STAT1和Survivin及其相關(guān)蛋白表達(dá)與人胃腺癌臨床病理學(xué)指標(biāo)之間的關(guān)系以及各蛋白表達(dá)之間的相關(guān)性，探討STAT1和Survivin的臨床意義，兩者在胃腺癌凋亡調(diào)控中可能存在的路徑以及兩者的相關(guān)性。 在人

3、胃腺癌組織中初步探討了STAT1和Survivin的相關(guān)性后，選用人胃癌細(xì)胞株SGC7901，分別和/或同時(shí)使用IFN-γ、不同濃度的STAT1反義寡核苷酸和不同濃度的Survivin反義寡核苷酸處理細(xì)胞，通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)的方法和圖像分析的方法觀察在STAT1和Survivin表達(dá)水平改變的情況下，兩者及其相關(guān)蛋白的表達(dá)變化；同時(shí)進(jìn)行Hoechest33258染色觀察細(xì)胞凋亡的變化。 方法：收集1989～2001年江漢大學(xué)附屬醫(yī)

4、院行胃腺癌手術(shù)標(biāo)本140例進(jìn)行臨床病理學(xué)研究，選用胃癌細(xì)胞系SGC7901進(jìn)行細(xì)胞生物學(xué)研究。胃腺癌手術(shù)標(biāo)本經(jīng)過(guò)溶脂法檢查獲取全數(shù)淋巴結(jié)，行4um間斷連續(xù)切片、常規(guī)HE染色和CK18+EMA免疫組化染色以獲取完整的淋巴結(jié)檢查資料，同時(shí)收集完整的病理學(xué)檢查資料。通過(guò)電話形式隨訪，所有隨訪者至少接受一次胃鏡檢查進(jìn)行臨床復(fù)查。建立胃癌組織芯片，經(jīng)免疫組織化學(xué)染色方法檢查胃癌原發(fā)灶中STAT1、Survivin、caspase3、caspase

5、7、p53和PTEN等蛋白表達(dá)的情況。全部數(shù)據(jù)均經(jīng)SAS8.1統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析處理，各分子指標(biāo)之間以及與臨床病理學(xué)指標(biāo)之間的相關(guān)性通過(guò)卡方檢驗(yàn)、spearman等級(jí)相關(guān)及精確概率法分析；生存曲線通過(guò)life-table法進(jìn)行繪制，各分子指標(biāo)和病理學(xué)指標(biāo)與生存之間的關(guān)系通過(guò)Cox模型回歸分析。 在SGC7901胃癌細(xì)胞中，分別和/或同時(shí)使用IFN-γ、不同濃度的STAT1反義寡核苷酸和不同濃度的Survivin反義寡核苷酸處理細(xì)

6、胞，通過(guò)免疫細(xì)胞化學(xué)染色和平均光密度分析，觀察STAT1、Survivin以及相關(guān)凋亡調(diào)節(jié)因子caspase7和p21WAF在蛋白水平的表達(dá)變化。通過(guò)Hoechest33258染色，在高倍鏡下觀察細(xì)胞亮度及形態(tài)學(xué)變化以檢測(cè)凋亡，并隨機(jī)數(shù)取1000個(gè)細(xì)胞進(jìn)行凋亡細(xì)胞記數(shù)。數(shù)據(jù)均經(jīng)SAS8.1統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行分析處理，平均光密度值之間的差異通過(guò)t檢驗(yàn)分析。 結(jié)果： 1.140例胃腺癌制成288點(diǎn)組織芯片一枚。經(jīng)免疫組織化學(xué)染色

7、及結(jié)果判讀，組織芯片平均利用率為83.3％。 各分子指標(biāo)之間關(guān)系如下： Survivin和STAT1(χ2=4.11，P=0.043)、caspase3(χ2=5.76，P=0.02)負(fù)相關(guān)，與PTEN(χ2=4.17，P=0.04)正相關(guān)； STAT1和caspase3(χ2=13.33，P＜0.001)、caspase7(χ2=5.84，P=0.016)正相關(guān)；caspase3和caspase7正相關(guān)(χ2=

8、23.98，P＜0.001)；p53和PTEN正相關(guān)(P=0.048)。 2.140例胃腺癌中，男性99例，女性41例(構(gòu)成比分別是71％和29％)。年齡26～72歲，中位年齡58歲。腫塊大小0.8～15cm，中位大小5.4cm。浸潤(rùn)深度按照UICC分期，T1：16例，T2：22例，T3：45例，T4：57例。高分化型腺癌52例，低分化型腺癌88例。有異質(zhì)性胃腺癌84例，無(wú)異質(zhì)性胃腺癌56例。共獲取淋巴結(jié)共8892枚，63.5枚

9、/例(17～157枚，中位數(shù)：61枚，95％CI：59-68)。其中102例存在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，共檢出轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)1824枚(1824/8892，20.5％)。按照AJCC/UICC淋巴結(jié)分期標(biāo)準(zhǔn)，N0期38例，N1期34例，N2期30例，N3期38例。 各分子指標(biāo)與病理學(xué)指標(biāo)關(guān)系如下： UICC淋巴結(jié)分期：Survivin表達(dá)陽(yáng)性率與UICC淋巴結(jié)分期負(fù)相關(guān)(P=0.04)。其他分子指標(biāo)與UICC淋巴結(jié)分期無(wú)關(guān)。 浸

10、潤(rùn)深度：STAT1表達(dá)陽(yáng)性率(r=-0.21，P=0.03)與浸潤(rùn)深度負(fù)相關(guān)；PTEN表達(dá)陽(yáng)性率(P=0.02)與浸潤(rùn)深度正相關(guān)。其他分子指標(biāo)與浸潤(rùn)深度無(wú)關(guān)。組織學(xué)分型：Survivin在高分化型腺癌中表達(dá)陽(yáng)性率高于低分化型腺癌中表達(dá)陽(yáng)性率，有顯著性差異(χ2=4.83，P=0.03)。STAT1在高分化型腺癌中表達(dá)陽(yáng)性率低于低分化型腺癌中表達(dá)陽(yáng)性率，有顯著性差異(χ2=10.2，P=0.0001)。p53在高分化型腺癌中表達(dá)陽(yáng)性率低于

11、低分化型腺癌中表達(dá)陽(yáng)性率(χ2=7.21，P=0.007)。PTEN在高分化型腺癌中表達(dá)陽(yáng)性率高于低分化型腺癌中表日性率(χ2=5.47，P0.02)。其他分子指標(biāo)與組織學(xué)分型無(wú)關(guān)。 異質(zhì)性：caspase3在有異質(zhì)性胃癌中表達(dá)陽(yáng)性率高于無(wú)異質(zhì)性胃癌中表達(dá)陽(yáng)性率，有顯著性差異(χ2=7.36，P=0.007)。其他分子指標(biāo)與異質(zhì)性無(wú)關(guān)。年齡：p53在＜60歲年齡組表達(dá)陽(yáng)性率低于≥60歲年齡組表達(dá)陽(yáng)性率，有顯著性差異(χ2=7.2

12、0，P=0.007)。PTEN在＜60歲年齡組中表達(dá)陽(yáng)性率低于≥60歲年齡組中表達(dá)陽(yáng)性率(χ2=4.37，P=0.04)。其他分子指標(biāo)與年齡無(wú)關(guān)。性別：各分子指標(biāo)與性別均無(wú)關(guān)。 3.通過(guò)電話及臨床復(fù)查形式隨訪病例共110例，隨訪時(shí)間截至于2005年7月，所有隨訪者至少接受過(guò)一次胃鏡檢查。胃癌浸潤(rùn)深度(χ2=7.26，P=0.007)以及UICC淋巴結(jié)分期(χ2=4.01，P=0.045)與生存時(shí)間有關(guān)。其他分子指標(biāo)和病理學(xué)指標(biāo)與

13、生存無(wú)關(guān)。 4.在IFN-γ刺激SGC7901胃癌細(xì)胞時(shí)，STAT1、caspase7和p2IWAF表達(dá)水平明顯上調(diào)(P＜0.05)；Survivin表達(dá)水平明顯下調(diào)(P＜0.05)。在IFN-γ刺激SGC7901胃癌細(xì)胞的同時(shí)，使用不同濃度的STAT1反義寡核苷酸抑制STAT1的表達(dá)，STAT1、caspase7和p21WAF表達(dá)水平出現(xiàn)不同程度的下調(diào)(均P＜0.05)；Survivin表達(dá)水平出現(xiàn)不同程度的上調(diào)(P＜0.05

14、)。 5.在使用不同濃度的Survivin反義寡核苷酸抑制Survivin的表達(dá)時(shí)，Survivin表達(dá)量出現(xiàn)不同程度的降低(P＜0.05)；STAT1表達(dá)水平出現(xiàn)上調(diào)(P＜0.05)；caspase7和p21WAF表達(dá)水平無(wú)明顯變化(P＞0.05)。6.胃癌SGC7901細(xì)胞株在各處理組中，凋亡無(wú)明顯變化(P＞0.05)。 結(jié)論： 1、胃腺癌組織中，STAT1表達(dá)與caspase3、7表達(dá)正相關(guān)。Survivi

15、n表達(dá)與caspase3表達(dá)正相關(guān)。STAT1表達(dá)與Survivin表達(dá)負(fù)相關(guān)。提示胃腺癌組織中STAT1和Survivin均可通過(guò)caspase3等凋亡調(diào)節(jié)點(diǎn)發(fā)揮其生物學(xué)作用，而STAT1和Survivin之間存在相關(guān)性。 2、STAT1和Survivin在胃癌發(fā)展的過(guò)程中發(fā)揮重要作用。STAT1蛋白表達(dá)是推測(cè)進(jìn)展期胃癌的分子標(biāo)志物。Survivin蛋白表達(dá)是推測(cè)胃癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及轉(zhuǎn)移程度的分子標(biāo)志物。 3、Surviv

16、in表達(dá)陽(yáng)性率與UICC淋巴結(jié)分期負(fù)相關(guān)，在高分化型腺癌中表達(dá)陽(yáng)性率高；STAT1表達(dá)陽(yáng)性率與浸潤(rùn)深度負(fù)相關(guān)，在高分化型腺癌中表達(dá)陽(yáng)性率低。在不同惡性程度的胃癌組織中，凋亡調(diào)節(jié)蛋白STAT1和Survivin表達(dá)水平的變化，提示胃癌惡性程度越高，其凋亡水平可能越高。 4、胃腺癌中，按照淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移數(shù)目進(jìn)行的分期和浸潤(rùn)深度是重要的預(yù)后指標(biāo)。 5、胃癌細(xì)胞系SGC7901中，STAT1的上調(diào)可促進(jìn)caspase7和p21WAF

17、表達(dá)的上調(diào)。進(jìn)一步證實(shí)胃癌細(xì)胞中STAT1可通過(guò)對(duì)caspase7和p21WAF表達(dá)的調(diào)控發(fā)揮其生物學(xué)作用。Survivin表達(dá)量的改變未引起caspase7和p21WAF表達(dá)量的變化。提示Survivin并不能通過(guò)對(duì)caspase7和p2IWAF的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)發(fā)揮其生物學(xué)作用，該結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)告Survivin通過(guò)與caspase7和p2iWAF結(jié)合而發(fā)揮抑制凋亡作用的機(jī)制一致。 6、在分別改變胃癌細(xì)胞系SGC7901中STAT1和