谷跗線螨的形態(tài)學(xué)觀察、抗原定位及精氨酸激酶基因的克隆與序列分析.pdf

1、由變應(yīng)原引起的變態(tài)反應(yīng)性疾病(如哮喘、變應(yīng)性鼻炎等)是當(dāng)前世界性的重大衛(wèi)生學(xué)問題，總發(fā)病率高達(dá)10％～30％，并有逐年增多的趨勢。谷跗線螨作為一種常見的倉儲(chǔ)螨類，以往人們對其關(guān)注較少，其形態(tài)特征、組織結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和生物學(xué)特性尚不十分明了。
　　為進(jìn)一步明了谷跗線螨的基本生物學(xué)尤其是其顯微形態(tài)特點(diǎn)，探討其與粉塵螨抗原的交叉反應(yīng)性，并嘗試探討其致敏原的相關(guān)分子，本研究進(jìn)行了以下三方面的工作：
　?。?）谷跗線螨的掃描電鏡觀察及其內(nèi)部

2、主要器官的觀察：從空調(diào)濾網(wǎng)灰塵中采集谷跗線螨，在體視顯微鏡下清洗處理活螨后，用SEM觀察其外部形態(tài)特征。經(jīng)形態(tài)鑒定確認(rèn)為該螨種后，以Bouin液固定，制作谷跗線螨石蠟切片， HE染色后光鏡觀察其內(nèi)部形態(tài)結(jié)構(gòu)。結(jié)果清晰地觀察到谷跗線螨的體表形態(tài)以及主要的內(nèi)部器官的構(gòu)造，明確了谷跗線螨顎體、背板、基節(jié)板、表皮內(nèi)突、背足體、剛毛等外部形態(tài)以及其消化道等的內(nèi)部結(jié)構(gòu)特點(diǎn)。
　?。?）谷跗線螨與粉塵螨交叉反應(yīng)性變應(yīng)原的定位研究：制作谷跗線螨石

3、蠟切片，先用對粉塵螨過敏患者的陽性血清作為一抗孵育，再用生物素標(biāo)記的羊抗人 IgE抗體作為二抗，免疫組織化學(xué)染色后在光學(xué)顯微鏡下分析其交叉反應(yīng)性抗原存在位置。研究發(fā)現(xiàn)谷跗線螨口咽部、中腸、腸內(nèi)容物、腸壁及生殖腺等均有陽性反應(yīng)。研究表明谷跗線螨體內(nèi)存在可誘發(fā)人體 IgE抗體的變應(yīng)原，主要分布于螨消化道、腺體及體壁等部位。
　?。?）谷跗線螨精氨酸激酶（arginine kinase,AK）基因的克隆及序列分析：從空調(diào)濾網(wǎng)灰塵中采集谷

4、跗線螨（約3000只）提取總 RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄 RT－PCR擴(kuò)增谷跗線螨AK基因后測序?？寺～@得的谷跗線螨AK基因由724個(gè)堿基組成，其編碼的蛋白相對分子質(zhì)量約為26019，等電點(diǎn)為10.10。成功克隆了谷跗線螨AK基因，為進(jìn)行谷跗線螨AK蛋白的重組表達(dá)以及過敏原性分析奠定基礎(chǔ)。
　　上述研究積累了有關(guān)谷跗線螨顯微形態(tài)、與已知過敏原的交叉反應(yīng)性和過敏原相關(guān)分子研究的新資料，為今后谷跗線螨過敏性疾病的特異性診斷、治療和預(yù)防奠定工作基