雌二醇、來曲唑?qū)η嗄甑半u髓質(zhì)骨形成的影響及其機(jī)理研究.pdf

1、雌禽性成熟前，在股骨和脛骨骨髓腔中新生大量針狀骨，稱之為髓質(zhì)骨。髓質(zhì)骨的產(chǎn)生與體內(nèi)雌激素濃度升高有關(guān)，并伴隨著整個產(chǎn)蛋期而存在。在產(chǎn)蛋周期中，髓質(zhì)骨進(jìn)行周期性吸收和重建，為蛋殼鈣化提供鈣源。髓質(zhì)骨反復(fù)地吸收與重建，最終使皮質(zhì)骨變薄、蛋雞發(fā)生骨質(zhì)疏松。本文通過雌激素和抗雌激素藥物來研究其對蛋雞髓質(zhì)骨形成的影響，并進(jìn)一步探討其機(jī)理，為蛋雞骨質(zhì)疏松癥防治提供理論依據(jù)。 試驗(yàn)I：雌二醇對雞髓質(zhì)骨形成及其受體表達(dá)的影響 本試驗(yàn)研究

2、了雌激素對青年蛋雞髓質(zhì)骨形成的誘導(dǎo)作用及其對雌激素受體表達(dá)的影響。14周齡135羽公雞，115羽母雞預(yù)飼1周后，各隨機(jī)殺5只采骨骼樣品，然后將剩余的公、母雞各隨機(jī)平均分為兩組，A組為公雞對照組，B組為公雞試驗(yàn)組、肌注17β-雌二醇2 mg/d；C組為母雞對照組，D組為母雞試驗(yàn)組、口服來曲唑0.5 mg/d，試驗(yàn)為期18 d。在試驗(yàn)開始和試驗(yàn)過程中采集骨組織用于骨切片制作。試驗(yàn)結(jié)果顯示，A組未見髓質(zhì)骨產(chǎn)生；B組在試驗(yàn)第6天開始產(chǎn)生髓質(zhì)骨，

3、C組約在性成熟前10 d左右開始出現(xiàn)髓質(zhì)骨，D組未見髓質(zhì)骨產(chǎn)生。雌激素免疫組化結(jié)果表明，試驗(yàn)開始時，A、B組雌激素受體表達(dá)量極顯著低于C、D組(P<0.01)；實(shí)驗(yàn)結(jié)束時，B、C組之間比較，雌激素受體表達(dá)量差異不顯著，但極顯著高于A(P<0.01)；D組試驗(yàn)結(jié)束時未見雌激素受體表達(dá)。 結(jié)論：雌激素可以誘導(dǎo)雌激素受體大量表達(dá)，促進(jìn)髓質(zhì)骨產(chǎn)生。 試驗(yàn)II：青年蛋雞骨超微結(jié)構(gòu)研究及其在髓質(zhì)骨形成過程中的變化 本試驗(yàn)研究

4、了青年蛋雞骨骼的超微結(jié)構(gòu)形態(tài)及髓質(zhì)骨形成過程中的骨超微結(jié)構(gòu)的變化。14周齡135羽公雞，115羽母雞預(yù)飼1周后，各隨機(jī)殺5只采骨骼樣品，然后將剩余的公、母雞各隨機(jī)平均分為兩組，A組為公雞對照組，B組為公雞試驗(yàn)組、肌注17β-雌二醇2 mg/d；C組為母雞對照組，D組為母雞試驗(yàn)組、口服來曲唑0.5 mg/d，試驗(yàn)為期18 d。在試驗(yàn)開始和試驗(yàn)過程中采集骨組織用于電鏡掃描觀察。試驗(yàn)結(jié)果顯示，在掃描電鏡下，骨小梁呈表面粗糙的板狀，表面有成骨細(xì)

5、胞和破骨細(xì)胞附著；成骨細(xì)胞呈小顆粒狀，顏色稍亮；破骨細(xì)胞體積較大，多為團(tuán)狀、片狀、條狀；骨鹽晶體成片狀生長在骨小梁表面。在髓質(zhì)骨形成期間，骨小梁表面有大量成骨細(xì)胞附著，破骨細(xì)胞相對較少。 結(jié)論：髓質(zhì)骨形成主要以成骨方式進(jìn)行，與成骨細(xì)胞關(guān)系密切。 試驗(yàn)Ⅲ：髓質(zhì)骨形成對骨形態(tài)計(jì)量學(xué)及骨放射密度的影響 本試驗(yàn)研究了蛋雞髓質(zhì)骨形成階段其骨形態(tài)計(jì)量學(xué)和骨密度的變化。14周齡135羽公雞，115羽母雞預(yù)飼1周后，各隨機(jī)殺5只

6、采骨骼樣品，然后將剩余的公、母雞各隨機(jī)平均分為兩組，A組為公雞對照組，B組為公雞試驗(yàn)組、肌注17β-雌二醇2 mg/d；C組為母雞對照組，D組為母雞試驗(yàn)組、口服來曲唑0.5 mg/d，試驗(yàn)為期18 d。在試驗(yàn)開始時和試驗(yàn)過程中采集骨組織用于骨形態(tài)計(jì)量學(xué)和骨放射密度的測定。結(jié)果顯示，A、B組骨皮質(zhì)指數(shù)差異不顯著，C組顯著低于D組(P<0.05)；A組皮質(zhì)骨面積顯著大于B、C和D組(P<0.05)；A組皮質(zhì)骨面積百分率與其他各組相比差異不顯

7、著，B組顯著高于C組(P<0.05)；C、D組之間差異不顯著。A、B組比較，骨放射密度差異不顯著，但A組顯著高于D組(P<0.05)，B組顯著高于C和D組，C組顯著高于D。 結(jié)論：髓質(zhì)骨形成之初對皮質(zhì)骨沒有影響，髓質(zhì)骨具有一定的放射密度。雌、雄激素均可促進(jìn)骨骼生長，但雄激素作用強(qiáng)于雌激素；來曲唑可抑制青年蛋雞骨骼發(fā)育。 試驗(yàn)Ⅳ：雌二醇對蛋雞骨代謝生化指標(biāo)的影響 本試驗(yàn)研究了雌激素誘導(dǎo)蛋雞髓質(zhì)骨形成過程中血漿鈣、磷

8、、ALP、StrACP的變化。14周齡135羽公雞，115羽母雞預(yù)飼1周后，各隨機(jī)采集10份血液樣品并殺5羽采骨骼樣品，然后將剩余的公、母雞各隨機(jī)平均分為兩組，A組為公雞對照組，B組為公雞試驗(yàn)組、肌注17β-雌二醇2 mg/d；C組為母雞對照組，D組為母雞試驗(yàn)組、口服來曲唑0.5 mg/d，試驗(yàn)為期18 d。在試驗(yàn)開始時和試驗(yàn)過程中采集血液樣品，進(jìn)行血液生化和性激素水平測定。結(jié)果表明，A組雄激素水平隨蛋雞日齡增加而上升且極顯著高于B組(

9、P<0.01)；C組雄激素水平基本恒定，在試驗(yàn)后期顯著低于D組(P<0.05)。A組雌激素水平基本恒定，且顯著低于B組(P<0.05)；B組雌激素濃度在試驗(yàn)初期明顯上升，后又有所下降；C組雌激素水平隨日齡增加而上升，且顯著高于D組(P<0.05)；D組用藥后，雌激素水平下降。各組血漿鈣均有升高的趨勢；A組血漿鈣水平顯著低于B、C組(P<0.05)，A、D組比較差異不顯著；B組血漿鈣水平顯著高于C、D組(P<0.05)；C組血漿鈣顯著高于

10、D組(P<0.05)。B組血漿磷濃度顯著高于其他三組，其余各組血漿磷水平差異不顯著。各組StrACP均有上升趨勢，各組差異不顯著。各組ALP均有升高趨勢，A組ALP活性低于B組，但差異不顯著；到試驗(yàn)后期C組ALP活性顯著高于D組(P<0.05)。 結(jié)論：雌激素可以提高血漿鈣、磷水平，增加StrACP和ALP活性，髓質(zhì)骨形成時體內(nèi)進(jìn)行著旺盛的骨代謝。來曲唑有顯著的雌激素抑制作用。 試驗(yàn)Ⅴ：雌二醇對體外雞胚成骨細(xì)胞增殖及凋亡

11、的影響 本試驗(yàn)研究了不同濃度雌激素和來曲唑?qū)w外雞胚成骨細(xì)胞增殖的影響及雌激素對成骨細(xì)胞凋亡的影響。應(yīng)用酶消化法獲取15日齡雞胚額骨成骨細(xì)胞，用不同濃度的雌激素和來曲唑處理10 h、24 h后，通過MTT法測定細(xì)胞增殖率。將0 pg/mL、20 pg/mL雌激素培養(yǎng)基處理成骨細(xì)胞24 h后，經(jīng)annexin V-FITC和PI染色后，用流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞的凋亡和周期情況。結(jié)果表明，雌激素對成骨細(xì)胞增殖有一定的促進(jìn)作用，20pg/

12、mL時增殖作用最強(qiáng)；250 nglmL來曲唑?qū)Τ晒羌?xì)胞有顯著的促增殖作用。雌激素組成骨細(xì)胞凋亡率為0.17％，對照組為1.18％。 結(jié)論：雌激素可促進(jìn)成骨細(xì)胞增殖，并具有抗成骨細(xì)胞凋亡的作用。 試驗(yàn)Ⅵ：雌二醇對體外雞胚成骨細(xì)胞ALP活性及其雌激素受體基因表達(dá)的影響 本試驗(yàn)研究了不同濃度雌激素對體外培養(yǎng)雞胚成骨細(xì)胞ALP活性的影響，并進(jìn)一步研究雌激素對成骨細(xì)胞雌激素受體表達(dá)的作用，以探討雌激素的作用機(jī)理。應(yīng)用酶消化

13、法獲取15日齡雞胚額骨成骨細(xì)胞，用不同濃度的雌激素和來曲唑處理24 h后，通過PNPP測定細(xì)胞ALP活性。將20 pg/mL雌激素和250 ng/mL來曲唑處理成骨細(xì)胞24 h，用RT-PCR的方法檢測雌激素受體基因的相對表達(dá)情況，并用β-actin作為內(nèi)參照予以矯正。結(jié)果顯示，10 pg/mL雌激素組堿性磷酸酶活性顯著高于對照組，來曲唑?qū)A性磷酸酶活性沒有明顯影響。與對照組相比，雌激素可以誘導(dǎo)雌激素受體基因表達(dá)，來曲唑則抑制雌激素受體