變鏈素對(duì)牙菌斑生物膜主要細(xì)菌影響研究.pdf

1、菌斑生物膜是黏附于牙齒表面的微生物團(tuán)體，是齲病發(fā)生的始動(dòng)因子。 生物膜中細(xì)菌的基因表達(dá)和表型明顯不同于浮游細(xì)菌，對(duì)抗生素具有較強(qiáng)的抵抗力。變形鏈球菌是公認(rèn)的致齲菌，變鏈素(mutacin)是由變形鏈球菌所產(chǎn)生的具有抑菌效果的細(xì)菌素。它有抑制與本菌不同株或不同型以及其它類型相近的細(xì)菌的生長(zhǎng)，以維持其本身生存需要的作用，也是細(xì)菌在生存中的一個(gè)重要競(jìng)爭(zhēng)手段。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)固相合成技術(shù)、抑菌實(shí)驗(yàn)技術(shù)、動(dòng)物實(shí)驗(yàn)技術(shù)，人工合成了mutacinⅠ

2、、Ⅲ及組成它們的8 條短肽的一級(jí)結(jié)構(gòu)，并對(duì)其進(jìn)行抑菌活性檢測(cè)，為進(jìn)一步的應(yīng)用研究奠定了基礎(chǔ)。 1．MutacinⅠ、Ⅲ多肽及短肽的設(shè)計(jì)合成研究本實(shí)驗(yàn)采用Fmoc固相多肽合成技術(shù)人工合成變形鏈球菌多肽Ⅰ、Ⅲ型mutacin及8條短肽。使用高效液相色譜儀分析提純，使用質(zhì)譜法碎片結(jié)構(gòu)分析技術(shù)，對(duì)合成產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果表明，準(zhǔn)確合成了Ⅰ型的全部24及Ⅲ型的全部22個(gè)氨基酸序列，準(zhǔn)確純度達(dá)80％，即具有抑菌活性。經(jīng)質(zhì)譜數(shù)據(jù)分析,峰值與初始

3、分子量的誤差< 2‰，說(shuō)明多肽合成成功（短肽合成與鑒定技術(shù)同上）。成功合成變形鏈球菌Ⅰ、Ⅲ型mutacin多肽及短肽，為多肽防齲疫苗研究提供了基礎(chǔ)。 2．MutacinⅠ、Ⅲ及短肽的體外抑菌研究本實(shí)驗(yàn)研究人工合成mutacinⅠ、Ⅲ及短肽對(duì)牙菌斑主要致齲菌的抑制作用，尋找其活性基團(tuán)。采用二倍稀釋法檢測(cè)系列短肽對(duì)變形鏈球菌和血鏈球菌的最小抑菌濃度，并檢測(cè)其對(duì)變形鏈球菌、血鏈球菌、韋榮氏菌、粘性放線菌、內(nèi)氏放線菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌的抑菌圈

4、直徑大小。結(jié)果顯示人工合成mutacinⅠ及Ⅲ及部分短肽類似物對(duì)變形鏈球菌、遠(yuǎn)緣鏈球菌、血鏈球菌有抑菌活性。MutacinⅠ、Ⅲ對(duì)變形鏈球菌的最小抑菌濃度為50％，即濃度在0.5mmol/ml以上具有抑菌能力，而合成的短肽對(duì)于變形鏈球菌沒(méi)有抑制作用。 MutacinⅠ對(duì)血鏈球菌無(wú)抑菌效果，mutacinⅢ對(duì)血鏈球菌的最小抑菌濃度為50％，3號(hào)短肽與8號(hào)短肽對(duì)血鏈球菌的最小抑菌濃度為50％，其他短肽對(duì)血鏈球菌均無(wú)抑菌作用。根據(jù)其抑

5、菌活性，可初步確定其活性基團(tuán)位置。 3．MutacinⅠ、Ⅲ中具有活性的短肽的體內(nèi)抑菌實(shí)驗(yàn)研究通過(guò)應(yīng)用mutacinⅠ、Ⅲ中活性短肽，觀察大鼠口內(nèi)的菌斑生長(zhǎng)情況。 本實(shí)驗(yàn)選用SD 大鼠，適應(yīng)性喂養(yǎng)一周（接種鏈球菌）后，隨機(jī)分為4 組，定期涂擦實(shí)驗(yàn)藥物。觀察4 組大鼠上頜磨牙在擦藥前和擦藥2 周后的菌斑面積變化，用Photoshop 軟件和VC++6.0 軟件做菌斑面積統(tǒng)計(jì)，最后用SPSS統(tǒng)計(jì)軟件檢驗(yàn)。結(jié)果顯示活性短肽組大