柑橘黃化脈明病毒分子檢測(cè)及生物學(xué)研究.pdf

1、柑橘黃化脈明病毒（Citrusyellow clearing vein virus，CYVCV）作為2009年我國(guó)發(fā)現(xiàn)侵染柑橘的一種新病毒，對(duì)其分子特性和生物學(xué)特性研究較少。已有研究表明，CYVCV主要危害檸檬和酸橙，造成典型的黃化脈明癥狀。CYVCV可侵染多個(gè)柑橘品種，已有實(shí)驗(yàn)表明該病毒可高效地通過(guò)蚜蟲(chóng)從檸檬傳播到豆科植物，在柑橘之間傳播的昆蟲(chóng)傳播介體尚未明確，因此該病毒病害可能存在我國(guó)柑橘生產(chǎn)中大流行的風(fēng)險(xiǎn)。為明確CYVCV在我國(guó)柑

2、橘上的分布特點(diǎn)及CYVCV的分子特性和生物學(xué)特性，本研究利用RT-PCR對(duì)采集我國(guó)7個(gè)省份的柑橘樣品進(jìn)行了CYVCV檢測(cè)，測(cè)定了甲基轉(zhuǎn)移酶編碼基因分離物和外殼蛋白編碼基因序列分析CYVCV的分子特性，利用CYVCV感染的檸檬植株芽片嫁接到不同種類(lèi)柑橘進(jìn)行生物學(xué)特性研究。取得的研究結(jié)果如下:
　　1.2013-2015年期間對(duì)采自湖南、湖北、江西、四川、云南、貴州和浙江7個(gè)省的450份柑橘樣品利用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)CYVCV，共有

3、77份柑橘樣品被檢測(cè)到CYVCV，有6個(gè)省份的樣品檢測(cè)到CYVCV陽(yáng)性（浙江樣品外），其中湖南的樣品檢出率達(dá)到34.2％;對(duì)采自湖北的柑橘樣品進(jìn)行CYVCV的RT-PCR檢測(cè)其中當(dāng)陽(yáng)樣品的檢出率高達(dá)53.3％，但有些地區(qū)樣品中未檢測(cè)到CYVCV;通過(guò)對(duì)攜帶有CYVCV的樣品進(jìn)行癥狀進(jìn)行觀察和分析，葉背面葉脈附近水漬狀斑、葉脈凸起、葉脈透明和葉脈黃化可能與CYVCV的侵染相關(guān)，在有些未表現(xiàn)癥狀的樣品中也檢測(cè)到CYVCV陽(yáng)性，說(shuō)明CYVCV

4、侵染某些柑橘品種存在潛隱的特點(diǎn)。
　　2.對(duì)采集自湖南、湖北、江西、云南、四川和貴州6個(gè)省份的陽(yáng)性柑橘樣品上的， CYVCV分離物的甲基轉(zhuǎn)移酶編碼基因和外殼蛋白編碼基因進(jìn)行了測(cè)定，這些CYVCV分離物的met中的核苷酸相似性和氨基酸相似性均達(dá)到98％以上，與土耳其分離物Y1的核苷酸相似性為97-98％，氨基酸相似性98-99.3％，同時(shí)發(fā)現(xiàn)CYVCV中國(guó)分離物相對(duì)于土耳其分離物存在多個(gè)共變異位點(diǎn);系統(tǒng)進(jìn)化樹(shù)分析發(fā)現(xiàn)CYVCV分離物

5、分為兩大組:Ⅰ組和Ⅱ組，其中中國(guó)分離物全部聚集在Ⅰ組中，土耳其分離物Y1和巴基斯坦分離物PK聚集在Ⅱ組。
　　3.將感染CYVCV的檸檬芽片接種到甜橙、萊檬、枳殼和HB柚的柑橘實(shí)生苗，翌年春季在甜橙新梢葉片上表現(xiàn)脈明、脈黃和褪綠斑等癥狀，而在萊檬、枳殼和HB柚植株上未觀察到明顯癥狀，采用qRT-PCR分析發(fā)現(xiàn)，在接種CYVCV后2年生甜橙植株上部枝條葉片中CYVCV含量明顯高于中部和下部枝條葉片，且隨接種時(shí)間延長(zhǎng)，CYVCV在上部