小檗堿對(duì)高脂加鏈脲佐菌素誘導(dǎo)的糖尿病腎病大鼠腎臟的保護(hù)作用及其對(duì)G蛋白偶聯(lián)受體激酶的調(diào)控.pdf

1、目的:
　　根據(jù)小檗堿(berberine,BBR)對(duì)糖尿病腎病大鼠(diabeticnephropathy,DN)腎臟病理形態(tài)學(xué)的改善及血糖血脂的調(diào)節(jié),觀察BBR對(duì)DN大鼠腎功能的保護(hù)作用,檢測(cè)G蛋白偶聯(lián)受體激酶(G-protein-coupledreceptorkinases,GRKs)的表達(dá)情況及BBR對(duì)其的影響;并初步探討B(tài)BR對(duì)DN大鼠的作用特點(diǎn)及BBR對(duì)GRKs的影響與其保護(hù)大鼠腎功能的關(guān)系。
　　方法:

2、　　雄性SD大鼠先給予高脂飼料6周以后,在禁食不禁水12h條件下,一次性腹腔注射鏈脲佐菌素(streptozotocin,STZ)35mg/kg,誘導(dǎo)建立糖尿病模型。72h后測(cè)定空腹血糖值,以血糖值≥11.1mol/L納入實(shí)驗(yàn),符合條件的動(dòng)物隨機(jī)分為7組(n=10),即模型組、BBR組(50、100、200mg/kg)和陽(yáng)性藥對(duì)照組(依那普利、消渴丸和辛伐他汀),另設(shè)正常對(duì)照組和高脂對(duì)照組。持續(xù)每天一次灌胃給藥(intragastric

3、administration,ig)并繼續(xù)高脂飲食8周,實(shí)驗(yàn)期間觀察大鼠的一般狀況,每一周稱大鼠體重,每?jī)芍芪布馊⊙獪y(cè)血糖。給藥滿8周后,將大鼠放入代謝籠中,收集24h尿液;然后股動(dòng)脈采血,分離血清,檢測(cè)大鼠的24h尿蛋白總量(UP24h)、24小時(shí)尿微量白蛋白(UMAlb)、尿肌酐(UCr)、尿素氮(BUN)、甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、血肌酐(SCr)、高密度脂蛋白膽固醇(HDL-c)、低密度脂蛋白膽固醇(LDL-c)。取大

4、鼠腎臟,并稱重,計(jì)算相對(duì)腎重(腎重/體重,KW/BW);光學(xué)顯微鏡觀察HE染色及Masson染色后腎臟組織病理學(xué)變化;透射電鏡下觀察腎小球的超微結(jié)構(gòu);免疫組化法檢測(cè)大鼠腎臟皮質(zhì)纖維連接蛋白(Fibronectin,FN)、IV型膠原(collegentypeIV)、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-1(Transforminggrowthfactor-β1,TGF-β1)及結(jié)締組織生長(zhǎng)因子(connectivetissuegrowthfactor,CTGF

5、)的表達(dá)情況;Westernblotting法檢測(cè)腎皮質(zhì)的GRKs蛋白表達(dá)水平;放免法檢測(cè)腎皮質(zhì)中cAMP水平。
　　結(jié)果:
　　1、BBR對(duì)DN大鼠血糖水平和體重的影響
　　與正常組比較,DN模型組大鼠的血糖水平顯著升高,BBR(100mg/kg,200mg/kg)組在給藥第6～8周后,較模型組血糖顯著下降。
　　從給藥第2周開(kāi)始,模型組大鼠的體重與高脂對(duì)照組相比明顯降低;從給藥第3周開(kāi)始,模型組大鼠體重與正常

6、對(duì)照組比較顯著降低;各給藥組及陽(yáng)性對(duì)照組可減緩模型大鼠體重的下降,但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　2、BBR對(duì)DN大鼠腎功能指標(biāo)及血生化指標(biāo)的影響
　　本實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn),模型大鼠的KW/BW比值、微量白蛋白/尿肌酐比值(U.A/C)、總蛋白/尿肌酐比值(UP/C)、BUN、UCr、SCr、TG、TC、LDL-c水平比正常對(duì)照組顯著升高,而HDL-c水平則顯著下降;BBR(100mg/kg,200mg/kg)可改善DN大鼠的腎功能指

7、標(biāo)和生化指標(biāo)水平的異常。
　　3、BBR改善DN大鼠腎臟組織病理學(xué)的表現(xiàn)
　　與正常對(duì)照比較,DN模型大鼠光學(xué)顯微鏡下可見(jiàn)腎小球體積明顯增大,基底膜增厚及系膜基質(zhì)增多,部分腎小管細(xì)胞肥大,管腔變窄;部分伴有大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn),腎間質(zhì)部分小血管玻璃樣變;并見(jiàn)大量綠色深染的膠原纖維沉積在腎小球和腎小管部分。BBR給藥后,腎小球改變輕微,少數(shù)腎小管輕度擴(kuò)張,系膜輕度增生,炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少,僅有少量膠原纖維沉積,間質(zhì)纖維化區(qū)域與模型組

8、相比有所減輕。各陽(yáng)性對(duì)照組也有類似上述的改善作用。
　　4、BBR對(duì)DN大鼠腎組織超微結(jié)構(gòu)的影響
　　電鏡下觀察發(fā)現(xiàn),DN模型組與正常組相比腎小球腫脹變大,腎小球基底膜明顯增厚,不平整,局部足細(xì)胞足突大片融合甚至消失;BBR(50,100mg/kg,200mg/kg)各給藥組可不同程度地抑制腎小球基底膜增厚,有效地改善了足細(xì)胞的狀態(tài)。
　　5、BBR降低DN大鼠腎臟組織中IV型膠原、FN蛋白、TGF-β1及CTGF的表

9、達(dá)
　　免疫組化結(jié)果顯示,BBR(100mg/kg,200mg/kg)給藥組可顯著降低IV型膠原、FN蛋白、TGF-β1及CTGF的表達(dá)。
　　6、BBR調(diào)節(jié)DN大鼠腎皮質(zhì)中GRKs蛋白的表達(dá)水平
　　Westernblotting檢測(cè)發(fā)現(xiàn),與正常組相比,DN大鼠腎皮質(zhì)中GRK2和GRK3表達(dá)明顯升高,GRK4和GRK6蛋白表達(dá)有所降低;BBR(100,200mg/kg)給藥可不同程度地下調(diào)DN大鼠腎皮質(zhì)中增高的GRK

10、2和GRK3蛋白表達(dá)水平,上調(diào)DN大鼠腎皮質(zhì)中減少的GRK6蛋白表達(dá)水平,但對(duì)DN大鼠腎皮質(zhì)中降低的GRK4表達(dá)水平?jīng)]有明顯影響,通過(guò)比較各組間GRK5蛋白表達(dá)均沒(méi)有明顯差異。
　　7、BBR對(duì)DN大鼠腎皮質(zhì)中cAMP水平的影響
　　放免法結(jié)果顯示,DN模型組大鼠cAMP水平較正常組明顯降低,BBR可明顯上調(diào)cAMP水平。
　　結(jié)論:
　　1.BBR給藥6周前對(duì)DN大鼠血糖的影響不明顯,給藥6～8周后,較模型組血

11、糖顯著下降;BBR可改善U.A/C比值、UP/C比值、BUN、SCr等腎功能指標(biāo);BBR給藥可減緩模型大鼠體重的下降,但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。提示BBR對(duì)DN大鼠的作用特點(diǎn)體現(xiàn)在可明顯改善腎功能指標(biāo),同時(shí)經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間的給藥才能對(duì)DN大鼠血糖產(chǎn)生明顯改善作用;且隨著實(shí)驗(yàn)時(shí)間的延長(zhǎng),對(duì)體重影響不明顯。
　　2.BBR給藥8周后有效地改善了DN大鼠血生化指標(biāo),抑制腎臟IV型膠原、FN蛋白的過(guò)度產(chǎn)生和TGF-β1、CTGF炎性細(xì)胞因子水平,并改