β2-微球蛋白抗體激活非霍奇金淋巴瘤患者樹突狀細(xì)胞的免疫應(yīng)答.pdf

1、目的：樹突狀細(xì)胞(DC)是目前已知功能最強(qiáng)的抗原遞呈細(xì)胞，負(fù)載腫瘤抗原的DC能夠有效激活細(xì)胞毒性T細(xì)胞(CTL)并產(chǎn)生抗腫瘤免疫的能力，對清除腫瘤微小病灶和解決腫瘤復(fù)發(fā)具有重要的意義。但由于腫瘤抗原性弱，往往制約著DC的應(yīng)用。而特異性抗體可以直接誘導(dǎo)惡性淋巴瘤等多種腫瘤凋亡，具有針對性強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn)，并且有研究證實，部分抗體可以誘導(dǎo)DC激活CTL，增強(qiáng)抗腫瘤效應(yīng)，為治愈腫瘤帶來了希望。B2-微球蛋白(B2-microglobulin，B2-M

2、G)是一種小分子蛋白類物質(zhì)，以構(gòu)成MHC-Ⅰ類分子表達(dá)于所有有核細(xì)胞表面。在惡性淋巴瘤中，B2-MG水平與疾病的發(fā)生、進(jìn)展及療效相關(guān)，已成為惡性淋巴瘤預(yù)后判斷的重要因素之一。研究證明，B2-MG不能誘導(dǎo)DC成熟和T細(xì)胞活化，而B2-MG抗體是B2-MG特異性單克隆抗體，可以誘導(dǎo)包括NHL在內(nèi)的多種血液系統(tǒng)惡性腫瘤細(xì)胞凋亡，并且DC上表達(dá)有B2-MG的組成成分，如MHC-Ⅰ類、CD1及FcyR分子。本實驗用B2-MG抗體與NHL患者骨髓源

3、性DC共培養(yǎng)，探討B(tài)2-MG抗體能否與DC上相應(yīng)分子結(jié)合以激活DC，誘導(dǎo)CD4+Th1細(xì)胞活化和CTL抗NHL瘤細(xì)胞效應(yīng)，為增強(qiáng)DC疫苗在淋巴瘤治療中的應(yīng)用提供可行性依據(jù)。方法：采集初診NHL患者正常骨髓單個核細(xì)胞，常規(guī)經(jīng)GM-CSF、IL-4及TNF-a聯(lián)合誘導(dǎo)DC生成，分別以25ug/ml B2-MG、25ug/nd B2-MG抗體及25ug/ml B2-MG加等量B2-MG抗體與DC共培養(yǎng)作為實驗組A、B及C，以等量IgG與DC培

4、養(yǎng)作為對照組A，以DC單獨(dú)培養(yǎng)作為空白對照組。光鏡下觀察DC形態(tài)；流式細(xì)胞術(shù)分析DC免疫表型；ELISA法檢測IFN-γ分泌情況；MTT法檢測CTL；殺傷效應(yīng)。結(jié)果：NHL骨髓源性DC在加入B2-MG-(實驗組B)3小時后及繼續(xù)培養(yǎng)至第8天，DC表型CD1a、CD80、CD83、CD86和HLA-DR較空白對照組未見明顯升高(P>0.05)，隨后與患者自身T細(xì)胞培養(yǎng)，亦未見IFN-γ分泌明顯增多(296.37±40.04vs384.42

5、±23.86pg/ml，P>0.05)；加入B2-MG抗體(實驗組A)培養(yǎng)3小時后和第8天，除CD1a外其余4種表型均較實驗組B、對照組A和空白對照組表達(dá)升高，與自身T細(xì)胞共培養(yǎng)后，上清液中IFN-γ水平(628.99±30.59pg/ml)顯著高于對照組A(137.58±32.53pg/ml)和空白對照組(384.42±23.86pg/ml，P<0.05)，活化T細(xì)胞和NHL瘤細(xì)胞(Raji細(xì)胞)共孵育，殺傷率顯著高于空白對照組(P<

6、0.05)；進(jìn)一步實驗顯示，等量25ug/mlB2-MG和B2-MG抗體共孵育30min后沖擊DC(實驗組C)，亦具有激活CTL的能力，與實驗組A相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05). 結(jié)論：B2-MG作為一種腫瘤相關(guān)性抗原，因抗原性弱，與DC親和力低，不能明顯誘導(dǎo)NHL患者骨髓源性DC成熟和CD4+Th1細(xì)胞活化；而B2-MG抗體是B2-MG特異性單克隆抗體，能夠與DC結(jié)合并誘導(dǎo)DC成熟，同時負(fù)載B2-MG抗體的DC能夠顯著激