利妥昔單抗對實驗性變態(tài)反應性腦脊髓炎的作用機制研究.pdf

1、1利妥昔單抗對實驗性變態(tài)反應性腦脊髓炎的作用機制研究利妥昔單抗對實驗性變態(tài)反應性腦脊髓炎的作用機制研究摘要目的目的:通過觀察利妥昔單抗(RTX)對實驗性變態(tài)反應性腦脊髓炎(EAE)大鼠發(fā)病情況、中樞神經(jīng)系統(tǒng)病理改變、外周血中B細胞含量變化以及腦組織中白細胞介素4(IL4)、白細胞介素10(IL10)、白細胞介素17(IL17)、γ干擾素(IFNγ)的含量變化，探討RTX對EAE的治療作用及其可能的免疫學機制，為RTX治療多發(fā)性硬化(MS

2、)尋找充分的理論依據(jù)。方法：方法：1.分組、造模及給藥：采用粗制堿性髓鞘蛋白(CMBP)加福氏完全佐劑(CFA)皮下注射的方法建立EAE模型，EAE模型分為RTX治療組和EAE對照組，每組10只；正常對照組10只，按EAE模型組的方法注射生理鹽水及CFA。自造模當日開始給藥，EAE治療組腹腔注射RTX（200g只天），連續(xù)治療3天，正常對照組及EAE組腹腔注射生理鹽水0.3mld。于EAE對照組、RTX治療組連續(xù)3天癥狀評分無加重或四肢

3、癱瘓、死亡時作為EAE發(fā)病高峰期處死發(fā)病大鼠，瀕死大鼠在尚有心跳、體溫時處死，其余至觀察8周結束時全部處死。2.觀察大鼠發(fā)病情況、潛伏期、進展期和高峰期神經(jīng)功能障礙評分及死亡率的變化。3.采用光鏡觀察各組大鼠腦及脊髓組織病理變化。4.采用流式細胞儀計數(shù)外周血B細胞數(shù)。5.采用酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA法)檢測腦組織勻漿中IL4、IL10、IL17、IFNγ的含量。6.將EAE組及RTX組各指標進行相關性分析。7.所有數(shù)據(jù)采用SPSS17

4、.0進行統(tǒng)計分析。結果：結果：1.大鼠發(fā)病情況：（1）臨床癥狀：正常對照組大鼠無異常表現(xiàn)；EAE對照組及RTX治療組所有大鼠均發(fā)3IL4、IL10的含量與潛伏期呈明顯正相關(P均0.01)。②EAE對照組及RTX治療組大鼠外周血B細胞數(shù)、腦組織勻漿中IL17、IFNγ的含量與進展期呈明顯正相關(P均0.01)；EAE對照組及RTX治療組大鼠腦組織勻漿中IL4、IL10的含量與進展期呈明顯負相關(P均0.01)。③EAE對照組及RTX治療

5、組大鼠外周血B細胞數(shù)、腦組織勻漿中IL17、IFNγ的含量與高峰期神經(jīng)功能障礙評分呈明顯正相關(P0.05或P0.01)；EAE對照組及RTX治療組大鼠腦組織勻漿中IL4、IL10的含量與高峰期神經(jīng)功能障礙評分呈明顯負相關(P0.05或P0.01)。④EAE對照組及RTX治療組大鼠外周血B細胞數(shù)、腦組織勻漿中IL17、IFNγ的含量與HE染色病理評分呈明顯正相關(P0.05或P0.01)；EAE對照組及RTX治療組大鼠腦組織勻漿中IL4

6、、IL10的含量與HE染色病理評分呈明顯負相關(P0.05或P0.01)。結論：結論：1.采用多點皮下注射WSCHCFA誘導Wistar大鼠，建立EAE模型，EAE大鼠神經(jīng)功能障礙明顯，腦血管周圍炎性細胞浸潤，說明Wistar大鼠復制的急性EAE模型成功，模型穩(wěn)定、可靠。2.RTX能延長EAE大鼠發(fā)病潛伏期、縮短EAE發(fā)病進展期、減輕EAE大鼠神經(jīng)功能障礙、降低EAE動物的死亡率、減輕EAE大鼠病理損害，對EAE發(fā)病具有保護作用。3.R