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文檔簡介
1、雖然體細(xì)胞核移植技術(shù)在牛的方面已經(jīng)獲得了很大成功,但是提高核移植效率,仍是該技術(shù)研究的長遠(yuǎn)任務(wù)。許多技術(shù)環(huán)節(jié)需要改進(jìn)和完善,其中重組卵母細(xì)胞的卵——核融合在體細(xì)胞核移植技術(shù)中起著重要作用。在核移植中,融合率越高,可供培養(yǎng)的核移植胚胎數(shù)量越多,生產(chǎn)出的可用胚胎數(shù)就多,這樣核移植效率也就越高??梢姡亟M胚的融合率直接影響著核移植的效率,是核移植技術(shù)成功的關(guān)鍵環(huán)節(jié)之一。試驗(yàn)采用延邊黃牛耳皮膚成纖維細(xì)胞作供核細(xì)胞,MⅡ期去核卵母細(xì)胞作受體細(xì)胞,
2、擠壓法去核,卵周隙內(nèi)注核,電融合的方法對融合液、融合方法以及適宜融合方法的融合條件進(jìn)行研究,探尋適宜延邊黃牛體細(xì)胞克隆的最佳融合條件。試驗(yàn)結(jié)果以融合率、卵裂率和重組胚體外發(fā)育率來評定,結(jié)果如下:
1.0.25M、0.28M、0.30M不同濃度蔗糖融合液的融合率、卵裂率差異不顯著;在4-8細(xì)胞胚胎發(fā)育率上0.28M組是最好的,顯著高于0.25M組(51.01%vs32.95%,p<0.05),與0.30M組差異不顯著(40.12
3、%,p>0.05)。
2.0.25M、0.28M、0.30M不同濃度D-山梨醇融合液的融合率、卵裂率差異不顯著;在16細(xì)胞胚胎發(fā)育率上0.28M組與0.30M組差異不顯著(20.68% vs17.45%,p>0.05),顯著高于0.25M組(9.25%,p<0.05)。
3.0.25M、0.28M、0.30M不同濃度甘露醇融合液在融合率、卵裂率、4-8細(xì)胞胚胎發(fā)育率、16細(xì)胞胚胎發(fā)育率上,以0.28M組的效果最好,分
4、別為89.54%,82.64%,61.29%,23.70%;但三組間的各項(xiàng)差異均不顯著(p>0.05)。
4.0.28M蔗糖、D-山梨醇、甘露醇不同融合液對核移植效率的影響。三組的融合率差異不顯著(88.44%vs86.83%vs86.85%,p>0.05);蔗糖與甘露醇融合液的卵裂率(87.98%vs86.06%)和囊胚發(fā)育率(22.16%vs19.91%)差異不顯著(p>0.05),但顯著高于D-山梨醇融合液(78.64%
5、和10.14%,p<0.05)。
5.0.28M蔗糖融合液,融合液濃度梯度融合法的融合率、卵裂率和囊胚發(fā)育率均顯著高于普通融合法(92.98%vs88.55%;91.07%vs80.96%;40.06%vs30.19%,p<0.05)。
6.0.28M甘露醇融合液,融合液濃度梯度融合法的融合率、卵裂率和囊胚發(fā)育率均顯著高于普通融合法(91.22%vs84.89%;88.02%vs80.42%;39.51%vs29.1
6、9%,p<0.05)。
7.使用1200v/cm融合電場強(qiáng)度的融合率為89.07%與1100v/cm和1300v/cm的87.66%和90.14%差異不顯著(p>0.05),與1000v/cm的81.83%存在顯著差異(p<0.05);在卵裂率上1100v/cm和1200v/cm顯著高于1300v/cm(85.07% vs86.47% vs76.96%,p<0.05),與1000v/cm差異不顯著(80.85%,p>0.05)
7、;囊胚發(fā)育率以1200v/cm的29.59%最高,與1100v/cm的28.89%不存在差異(p>0.05),但顯著高于1000v/cm和1300v/cm的19.46%和14.61%(p<0.05)。
8.使用2次融合脈沖的融合率、卵裂率和囊胚發(fā)育率分別為88.03%,86.35%和31.63%,是適宜延邊黃牛體細(xì)胞克隆、融合液濃度梯度融合法的最佳脈沖次數(shù)。
9.脈沖時(shí)程為40μs的融合率與20μs、80μs差異不顯
8、著(86.10%vs83.30%vs84.60%,p>0.05),顯著高于10μs(79.60%,p<0.05);20μs,40μs的卵裂率(88.54%,83.61%vs74.21%,65.63%,p>0.05)和囊胚發(fā)育率(32.92%vs30.38%vs20.88%vs19.62%,p>0.05)顯著高于10μs、80μs。
結(jié)論:適宜延邊黃牛體細(xì)胞克隆的融合液為0.28M蔗糖融合液。融合液濃度梯度融合法能有效提高延邊黃
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