可視化裸鼠子宮內(nèi)膜異位癥模型的建立及評價.pdf

1、目的:本研究根據(jù)子宮內(nèi)膜異位癥特性，對卵巢巧克力囊腫患者的在位及異位子宮內(nèi)膜組織中的內(nèi)膜細胞進行離體培養(yǎng)，并將培養(yǎng)成功的細胞懸液注射至裸鼠腹部皮下，建立可視化裸鼠子宮內(nèi)膜內(nèi)異癥模型，并評價該方法的成模情況，為進一步研究子宮內(nèi)膜異位癥的發(fā)病機理等提供可靠模型。
　　方法:選取卵巢巧克力囊腫患者的在位及異位子宮內(nèi)膜組織，分離出內(nèi)膜細胞進行離體培養(yǎng)，并將細胞分為分離組（腺上皮細胞、間質(zhì)細胞）和混合組，然后觀察各組細胞的生長特性，應用吉姆

2、薩染色進行細胞形態(tài)鑒定，同時應用免疫熒光染色進行細胞特異性鑒定（波形蛋白及角蛋白的表達），最后將200ul不同數(shù)量(1.0×106、2.5×106、5.0×106、1.0×107)的各組細胞懸液注射至雌性裸鼠（5-6周齡）的腹部皮下，隨后分期觀察裸鼠皮下注射部位的變化，同時剝離種植的異位病灶制作標本，進行HE染色，光鏡下觀察各期病理組織學形態(tài)，遂對有腺體生長的異位病灶進行免疫組化檢測，進一步明確組織細胞的類型，最終比較分析各方法所得模型

3、的成模率及成模時間。
　　結(jié)果:分離培養(yǎng)的腺上皮細胞在體外不能傳代，分離培養(yǎng)的間質(zhì)細胞及混合培養(yǎng)的各組細胞均可傳代，混合培養(yǎng)的內(nèi)膜細胞的增殖能力較分離培養(yǎng)的間質(zhì)細胞強，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，混合培養(yǎng)的異位內(nèi)膜細胞的增殖能力較在位內(nèi)膜細胞強，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。實驗中觀察到生長良好的異位病灶呈隆起的囊泡樣結(jié)構(gòu)，表面有血管生成，病理學證實其內(nèi)有子宮內(nèi)膜腺體形成，免疫組化結(jié)果確定異位病灶細胞與人類內(nèi)膜細胞同源;

4、各組在第10天、第15天形成的異位病灶體積與5天時異位病灶體積比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，在第10天與第15天時形成的異位病灶體積比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05)。不同數(shù)量的在位細胞組模型在第5天、第10天和第15天時各組間成模率比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，其中細胞數(shù)量為5.0×106和1.0×107時的成模率比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);不同數(shù)量的異位細胞組模型在第5天、第10天和第15天時的成

5、模率比較，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)，其中細胞數(shù)量為5.0×106和1.0×107時的成模率比較，差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);細胞數(shù)量為5.0×106/200ul時，異位細胞組的成模率高于在位細胞，比較差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。
　　結(jié)論:腺上皮細胞必須與間質(zhì)細胞共培養(yǎng)才能傳代，間質(zhì)細胞能夠傳代但增殖能力較混合的內(nèi)膜細胞弱，混合培養(yǎng)的異位內(nèi)膜細胞較在位內(nèi)膜細胞增殖能力強;應用混合培養(yǎng)的第5-6代異位內(nèi)膜細胞，以