Morganella morganii J-8中羰基不對稱還原酶的分離純化及性質研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、隨著醫(yī)藥、農業(yè)、食品、精細化工等行業(yè)對光學純手性中間體需求的增長，人們已充分認識到手性的重要。酶法生物催化合成手性化合物因其獨特的優(yōu)勢成為近年來國內外研究的熱點。為深入研究該轉化過程中酶反應機制，進行酶的分離純化及酶學性質的研究，具有重要的現實意義和理論價值。 本實驗室篩選得到的MorganellamorganiiJ-8菌株，可將底物1-苯基-2-甲氨基丙酮(MAK)專一性地轉化為d-偽麻黃堿。本研究以Morganellamor

2、ganiiJ-8為出發(fā)菌株，對其產羰基不對稱還原酶的產酶條件、純化以及酶學性質進行研究，結果如下： 經對產酶條件的優(yōu)化，確定了產酶的較適培養(yǎng)基：葡萄糖3％、蛋白胨2.5％、酵母膏0.5％、K2HPO40.3％、MgSO4·7H2O0.2％、NaCl0.2％。最佳產酶條件是培養(yǎng)基初始pH7.5，以24h為最佳接種種齡；30℃，150rpm搖床培養(yǎng)為36h。 對粗酶的基本性質進行了研究，酶的最適作用溫度和最適PH分別是30℃

3、和7.5。在pH5～8范圍內酶的穩(wěn)定性較好，35℃以下比較穩(wěn)定。 菌體超聲破碎后，經硫銨沉淀、PhenylSuperose疏水柱層析、DEAD陰離子柱層析和非變性凝膠電泳四步純化獲得SDS-PAGE電泳純的羰基不對稱還原酶。亞基分子量為42.5kD。HPLC蛋白柱分析酶的分子量，分子量約為84.1kD，初步認為該酶為二聚體蛋白。 對所得到的部分純化酶的酶學性質做了初步研究，以NADH作為反應的輔酶時粗酶的酶活相對于以NA

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