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1、目的:觀察銀杏內(nèi)酯B(Ginkgolide B,GB)對(duì)小鼠短暫性局灶性腦缺血的保護(hù)作用及其對(duì)腦缺血再灌注損傷后NF-κB的激活以及炎癥反應(yīng)、細(xì)胞凋亡的影響
方法:采用小鼠短暫性大腦中動(dòng)脈阻塞(transient middle cerebral artery occlusion,tMCAO)模型觀察GB10、20、40 mg/kg對(duì)腦梗死體積、腦水腫及行為學(xué)癥狀的影響,小鼠腦缺血再灌注后即時(shí)尾靜脈注射給藥。應(yīng)用免疫熒光法分
2、析NF-κB的核轉(zhuǎn)位及小膠質(zhì)細(xì)胞的活化;采用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)TNF-α,IL-1β及iNOS mRNA的表達(dá);采用Western-blot法檢測(cè)小鼠大腦皮層IκBα,p-IκBα,p-IKKα,p53,Bcl-2,Bax及Caspase3蛋白含量。
結(jié)果:GB10、20、40 mg/kg靜脈注射呈劑量依賴性減少tMCAO小鼠腦梗死體積,降低腦含水量和改善行為學(xué)癥狀(P<0.05,P<0.01)。Western-blot
3、顯示:小鼠缺血再灌注3小時(shí)后大腦皮層缺血區(qū)IκBα的含量顯著降低(P<0.01),GB能顯著提高IκBα的含量(P<0.05,P<0.01),降低p-IκBα的含量(P<0.05)及p-IKKα的含量(P<0.05);免疫熒光證明:假手術(shù)組小鼠大腦皮層NF-κB p65主要表達(dá)在神經(jīng)細(xì)胞胞漿中;缺血再灌注3小時(shí)后,模型組小鼠大腦皮層大量p65蛋白表達(dá)于神經(jīng)細(xì)胞胞核,說明缺血使NF-κB從細(xì)胞漿移位至細(xì)胞核;GB20 mg/kg能明顯抑制
4、NF-κB的核轉(zhuǎn)位。免疫熒光亦證明:假手術(shù)組小鼠大腦皮層小膠質(zhì)細(xì)胞處于靜息狀態(tài),缺血再灌注2天后,模型組小鼠大腦皮層小膠質(zhì)細(xì)胞被激活,GB20 mg/kg能明顯抑制小膠質(zhì)細(xì)胞的活化。RT-PCR結(jié)果表明:小鼠缺血再灌注2天后大腦皮層缺血區(qū)TNF-α,IL-1β,iNOS mRNA的表達(dá)明顯增高,GB能明顯下調(diào)TNF-α,IL-1β,iNOS mRNA的表達(dá)(P<0.05,P<0.01)。Western-blot結(jié)果亦證明:缺血再灌注12
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