新生大鼠缺氧缺血性腦損傷HIF-1α表達(dá)與細(xì)胞凋亡的關(guān)系及干預(yù)研究.pdf

1、目的:利用新生大鼠缺氧缺血性腦損傷（hypoxic-ischemic brain damage，HIBD）動(dòng)物模型，觀察缺氧缺血性腦損傷后及缺氧誘導(dǎo)因子-1α(hypoxia-inducible factor lα，HIF-1α)抑制劑2-甲氧基雌二醇(2-Methoxyestradiol，2ME2)干預(yù)后對(duì)腦組織中HIF-1α表達(dá)趨勢(shì)的變化及與細(xì)胞凋亡的關(guān)系，探討抑制HIF-1α后對(duì)缺氧缺血性腦損傷的影響及可能的作用，以期為臨床治療新

2、生兒缺氧缺血性腦病(HIE)提供有效治療方案。
　　 方法:7日齡Wistar大鼠120只，雌雄不限，體重10～15g，隨機(jī)分為三組:假手術(shù)組(n=8)，HIBD模型組(n=56)，2ME2干預(yù)組(n=56)，其中后兩組根據(jù)HIBD后處死時(shí)間不同又分為7個(gè)亞組:3h組、6h組、12h組、1d組、2d組、3d組、7d組，每亞組各8只。HIBD模型組和2ME2干預(yù)組均先制備HIBD模型，采用Rice法建立新生大鼠缺氧缺血腦損傷模型:

3、假手術(shù)組給予頸正中切口游離左側(cè)頸總動(dòng)脈，不進(jìn)行缺氧缺血處理:HIBD模型組游離并接扎左側(cè)頸總動(dòng)脈后置于缺氧艙中（含8％氧氣和92%氮?dú)猓?h;2ME2干預(yù)組于HIBD后即刻一次性腹腔注射2ME2(10μg/g)。各組新生大鼠于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)斷頭取腦組織后肉眼觀察腦組織大體形態(tài)的改變，石蠟切片行HE染色光鏡下觀察左側(cè)腦組織病理變化，免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)各組新生大鼠腦組織HIF-1α和Caspase-3的表達(dá)及用TUNEL法測(cè)定細(xì)胞凋亡指數(shù)(A

4、I)。
　　 結(jié)果:(1)缺氧缺血后新生大鼠出現(xiàn)不同程度的行為異常。(2)缺氧缺血后可見(jiàn)腦組織大體可見(jiàn)不同程度的異常改變，2ME2干預(yù)后上述改變減輕。(3)HE染色:假手術(shù)組腦組織結(jié)構(gòu)及層次清晰，細(xì)胞形態(tài)正常;HIBD模型組于術(shù)后3～6h左側(cè)腦組織皮層細(xì)胞水腫，12～24h神經(jīng)元排列紊亂，少量局灶性壞死，2～3d神經(jīng)細(xì)胞凋亡明顯增多，7d后神經(jīng)元數(shù)目明顯減少，膠質(zhì)細(xì)胞增生。2ME2干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)損傷程度較HIBD模型組明顯減輕，

5、神經(jīng)細(xì)胞存活數(shù)量多，多數(shù)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)正常，細(xì)胞排列尚規(guī)則。(4)免疫組織化學(xué)染色:HIF-1α和Caspase-3陽(yáng)性染色呈棕黃色的細(xì)顆粒沉積，陽(yáng)性細(xì)胞表達(dá)于大腦皮層。假手術(shù)組中HIF-1α和Caspase-3無(wú)明顯陽(yáng)性表達(dá)。HIBD模型組中HIF-1α于HIBD后3h表達(dá)增強(qiáng)，12h時(shí)達(dá)高峰，1～7d時(shí)陽(yáng)性表達(dá)逐漸降低，但仍高于正常水平，與假手術(shù)組比較，HIBD模型組各時(shí)間點(diǎn)HIF-1α陽(yáng)性細(xì)胞平均灰度值均低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0

6、.05):Caspase-3于HIBD后3h表達(dá)增強(qiáng)，6-24h逐漸上升，2d達(dá)高峰,3～7d逐漸降低，但仍高于正常水平，與假手術(shù)組比較，HIBD模型組各時(shí)間點(diǎn)Caspase-3陽(yáng)性細(xì)胞平均灰度值均低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。2ME2干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)HIF-1α和Caspase-3陽(yáng)性表達(dá)明顯降低，陽(yáng)性細(xì)胞平均灰度值較HIBD模型組各時(shí)間點(diǎn)高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(5)TUNEL染色凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù):假手術(shù)組未見(jiàn)明顯凋

7、亡細(xì)胞。HIBD模型組術(shù)后3h即可出現(xiàn)凋亡細(xì)胞，隨著觀察時(shí)間的推移，凋亡細(xì)胞數(shù)逐漸增多。2ME2干預(yù)組各時(shí)間點(diǎn)凋亡細(xì)胞計(jì)數(shù)較HIBD模型組明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:(1)通過(guò)對(duì)缺氧缺血后新生大鼠行為能力的觀察以及大鼠腦組織病理學(xué)觀察，證實(shí)新生大鼠缺氧缺血性腦損傷模型建立成功，并且2ME2干預(yù)后可減輕缺氧缺血所致的腦損傷。(2)新生大鼠缺氧缺血腦損傷后，HIF-1α和Caspase-3表達(dá)增加呈同步