特發(fā)性肺動脈高壓患者外周血樹突狀細胞變化研究.pdf

1、背景與目的： 隨著免疫學研究的發(fā)展，免疫炎癥機制在特發(fā)性肺動脈高壓(IPAH)發(fā)病中的作用被關注。近來研究表明特發(fā)性肺動脈高壓的形成與樹突狀細胞參與炎癥反應密切相關。樹突狀細胞(DC)，作為機體唯一能激活初始T細胞的抗原提呈細胞，在機體免疫系統(tǒng)中處于核心地位。本研究通過觀察IPAH患者外周血樹突狀細胞亞群數量及功能的變化趨勢，評價其在IPAH發(fā)病機制中的作用。 方法： 1、研究對象 選取2007年4月至2

2、008年1月我院特發(fā)性肺動脈高壓(IPAH)患者21名，同時選取21名性別、年齡匹配的健康人群作為對照(NC)組。IPAH組除了肺動脈高壓的臨床表現(xiàn)外，無其他并發(fā)疾病，與NC組一致。所有研究對象均排除由心功能不全、腎功能不全、慢性肺臟疾病、睡眠呼吸暫停綜合癥、慢性血栓栓塞、自身免疫性疾病、膠原病、HIV感染、肝病、糖尿病所引起的肺動脈高壓。 2、采用四色流式細胞儀分析外周血樹突狀細胞(DC)亞群mDC(myeloid dendr

3、itic cell)、pDC(plasmacytoid dendritic cell)各自所占比例。.mDC不表達lin(CD19、CD20、CD56、CD14、CD3)，但高表達HLA-DR及CD11c；pDC不表達lin(CD19、CD20、CD56、CD14、CD3)，高表達HIA-DR及CD123。 3、應用ELISA試劑盒檢測IPAH組和NC組實驗對象外周血血清中IL-12、IL-10及TNF-α的濃度 4、人

4、外周血單核細胞來源樹突狀細胞(MoDC)的培養(yǎng) 取新鮮分離的IPAH患者和NC組外周血40ml，用淋巴細胞分離液收集單個核細胞，以貼壁法篩選單核細胞，種于含rhGM-CSF(20ng/mL)、rhIL-4(10ng/mL)、20％胎牛血清的完全培養(yǎng)基RPMI1640種，隔天半量換液，第5天收集部分懸浮細胞上流式檢測。留下部分第5天加入脂多糖(LPS)繼續(xù)培養(yǎng)2天，至第7天收集懸浮細胞作混合淋巴細胞反應用(MLR)。 5、

5、流式細胞儀檢測 第5天收集的懸浮未成熟樹突狀細胞表面表達CD86、CD1a、CD83、HLA-DR的陽性率，及其平均熒光強度(MFI)，CD分子以雙染法標記。 6、混合淋巴細胞反應檢測樹突狀細胞免疫功能：將MoDC(即DC1)與T淋巴細胞以1：20、1：10、1：5的比例加入RPMl1640培養(yǎng)基混合培養(yǎng)，種于96孔板，37℃孵育，72小時后加MTT，孵育4小時后檢測其OD值，看DC刺激T淋巴細胞增殖的能力。 結

6、果： 1、IPAH患者組外周血總DC數量明顯低于NC組(p<0.05)，尤其是mDC數量明顯低于NC組(p<0.05)，而pDC數量無明顯下降(p>0.05)。 2、ELISA檢測的結果顯示IPAH組患者血清中IL12濃度高于NC組，而IL-10和TNF-α濃度在兩組間無明顯差異。且IL-12濃度隨著外周血樹突狀細胞百分比的升高而降低，IL-10濃度與mDC百分比無相關性，TNF-α先隨著mDC百分比的升高而升高，超過某

7、一值后，隨著mDC百分比的升高而降低。 3、IPAH組患者體外培養(yǎng)的MoDC表面表達CD1a的DC陽性率及平均熒光強度明顯高于NC組(p<0.05)；表達CD86的細胞陽性率及平均熒光強度明顯低于NC組(p<0.05)。而表達CD83和HIA-DR的DC陽性率及其MFI在IPAH組和NC組無明顯差異(p>0.05)。 4、混合淋巴細胞反應的結果顯示IPAH組患者體外培養(yǎng)7天，以LPS刺激的MoDC刺激T淋巴細胞增殖能力較