20-羥二十烷四烯酸對絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞和子宮血管平滑肌細(xì)胞生物學(xué)行為的影響.pdf

1、目的：子癇前期是一種常見的孕婦多系統(tǒng)紊亂綜合征，是母體、胎兒發(fā)病率和病死率最高的疾病之一，其發(fā)病機制尚不清楚，但具有共同的病理學(xué)特征，即子宮螺旋動脈重塑不全。螺旋動脈重塑是正常妊娠的關(guān)鍵。妊娠初期，螺旋動脈管內(nèi)、外的絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞，與血管內(nèi)皮細(xì)胞、平滑肌細(xì)胞相互作用，介導(dǎo)其凋亡，并分泌基質(zhì)金屬蛋白酶(MMPs)降解螺旋動脈管壁的彈性基質(zhì)，同時分泌無定型類纖維素樣物質(zhì)取代細(xì)胞外基質(zhì)，形成絨毛外滋養(yǎng)細(xì)胞及纖維素樣物質(zhì)成為螺旋動脈管壁。重塑中

2、任何環(huán)節(jié)異常，將導(dǎo)致重塑不全和子癇前期。新近研究表明，花生四烯酸代謝產(chǎn)物20-羥二十烷四烯酸(20-HETE)是血管內(nèi)皮細(xì)胞及平滑肌細(xì)胞增殖、凋亡等的重要調(diào)節(jié)因子，其代謝異常與血管功能紊亂性疾病相關(guān)。綜合子癇前期、螺旋動脈重塑調(diào)控機制以及20-HETE的相關(guān)特征，本課題提出:20-HETE作為參與重塑過程及血管維護(hù)的多個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的上游調(diào)控因子，其代謝異常，相關(guān)信號不能準(zhǔn)確轉(zhuǎn)導(dǎo)，導(dǎo)致螺旋動脈重塑障礙以及血管功能紊亂，引發(fā)子癇前期。為證

3、實該假說，本課題應(yīng)用20-HETE及其抑制劑(HET0016)干預(yù)子宮螺旋動脈重塑過程的主要參與細(xì)胞（絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞和子宮血管平滑肌細(xì)胞），研究20-HETE對絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞、子宮血管平滑肌細(xì)胞增殖、凋亡和絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞介導(dǎo)子宮血管平滑肌細(xì)胞凋亡的影響，分析20-HETE對絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞浸潤過程中MMP-2分泌水平的作用環(huán)節(jié)。探討20-HETE對子宮螺旋動脈重塑的影響，可能為子癇前期的發(fā)病機制提供新思路。
　　方法：⑴建立傳代絨毛

4、膜滋養(yǎng)細(xì)胞和傳代子宮血管平滑肌細(xì)胞單培養(yǎng)以及絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞與子宮血管平滑肌細(xì)胞干預(yù)模型。⑵藥物最佳濃度和作用時間的確定:20-HETE及抑制劑(HET0016)以濃度梯度方式分別干預(yù)人絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞(HVT)、人子宮血管平滑肌細(xì)胞(HUVSMC)24小時或48小時，MTT法檢測細(xì)胞增殖情況。⑶HVT遷移能力檢測:Transwell小室測定HVT遷移數(shù)目。⑷HVT浸潤能力檢測:RT-PCR測定HVT基質(zhì)金屬蛋白酶-2(MMP-2)mRNA

5、水平，免疫組織化學(xué)技術(shù)測定HVT MMP-2蛋白表達(dá)，ELISA測定HVT培養(yǎng)上清液MMP-2的濃度。⑸HVT和HUVSMC的凋亡測定:流式細(xì)胞術(shù)。
　　結(jié)果：①藥物最佳作用濃度及時間:10ng/ml20-HETE作用48h后顯著促進(jìn)HVT、HUVSMC的增殖;10μg/ml HET0016作用48h后顯著抑制HVT、HUVSMC的增殖。②20-HETE抑制HVT的遷移能力:HVT單培養(yǎng)時，與對照組相比，20-HETE組的Tran

6、swell小室中HVT的遷移數(shù)目明顯減少;20-HETE與HET0016聯(lián)合干預(yù)組的遷移數(shù)目顯著減少;HET0016組的遷移數(shù)目顯著增加。③20-HETE抑制HVT的浸潤能力:HVT單培養(yǎng)時，與對照組相比，20-HETE組，HVT MMP-2的轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達(dá)及上清液濃度明顯降低;20-HETE與HET0016聯(lián)合干預(yù)組，其轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達(dá)及上清液濃度顯著降低;HET0016組，其轉(zhuǎn)錄水平、蛋白表達(dá)及上清液濃度顯著升高。④20-HE

7、TE抑制HVT和HUVSMC的凋亡:無論HVT、HUVSMC單培養(yǎng)，還是HVT-HUVSMC共培養(yǎng)，與對照組相比，20-HETE組，HVT、HUVSMC的凋亡率明顯降低;20-HETE與HET0016聯(lián)合干預(yù)組，HVT、HUVSMC的凋亡率顯著降低;HET0016組，HVT、HUVSMC的凋亡率顯著升高。
　　結(jié)論：20-HETE作為參與重塑過程及血管維護(hù)的多個信號轉(zhuǎn)導(dǎo)系統(tǒng)的上游調(diào)控因子，能夠促進(jìn)絨毛膜滋養(yǎng)細(xì)胞、子宮血管平滑肌細(xì)胞