異鼠李素抗腫瘤作用及其機理的研究.pdf

1、目的:從誘導(dǎo)腫瘤細胞分化和凋亡,抑制腫瘤細胞的增殖等方面對異鼠李素的抗腫瘤的作用及機制進行研究;采用現(xiàn)代時間生物學(xué)理論及其研究方法探討腫瘤細胞的基因表達和與增殖有關(guān)的酶活性的時間特征,找出異鼠李素藥物毒性反應(yīng)最低、療效作用最高的時間規(guī)律,為異鼠李素在臨床上擇時治療提供理論基礎(chǔ).方法與結(jié)果:1.利用MTT法測定異鼠李素對細胞生長的抑制、光鏡下計數(shù)繪制細胞生長曲線、光鏡和電子顯微鏡對細胞形態(tài)觀察、克隆形成和3H-TdR摻入分析,基因組DNA

2、片段分析、流式細胞術(shù)等方法研究異鼠李素對HeLa、Tca-8113、YTLMC-90、Eca-109細胞增殖和凋亡的作用.2.為了進一步證實異鼠李素的抑癌抗癌作用,對其抑制腫瘤生長增殖和誘導(dǎo)腫瘤細胞凋亡的分子機制進行了實驗研究.用TRAP-PCR法檢測異鼠李素處理后對人癌細胞端粒酶活性的影響;檢測過氧化氫酶活性;免疫組化方法測定PCNA表達的變化;流式細胞術(shù)方法研究異鼠李素處理腫瘤細胞后對腫瘤相關(guān)基因表達的影響;用流式細胞術(shù)和免疫熒光法

3、檢測異鼠李素處理前后抑制分化因子Id-1表達.3.觀察異鼠李素對鼠移植瘤的抑制作用.以鼠Lewis肺癌細胞復(fù)制C57BL/6移植瘤模型,鼠隨機分組用藥,對照組、異鼠李素組、異鼠李素提前灌胃組、順鉑組.用藥7天后收集標(biāo)本,采用光鏡、電鏡觀察,免疫組化分析PCNA、bcl-2、bax的表達.4.為了探討人食道癌Eca-109細胞DNA合成與c-myc基因表達的近日節(jié)律以及異鼠李素對二者的影響作用,達到有效治療腫瘤的目的,我們用3H-TdR摻