抗原沖擊樹突狀細(xì)胞介導(dǎo)CTL特異性抗白血病作用的體外研究.pdf

1、目的：研究白血病患者骨髓來源的單個(gè)核細(xì)胞體外誘導(dǎo)為樹突狀細(xì)胞的有效方法；觀察不同途徑來源的白血病抗原沖擊樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞特異性的抗白血病效應(yīng)，為急性髓性白血病免疫治療提供理論依據(jù)。 方法：10例急性髓性白血病患者骨髓經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離單個(gè)核細(xì)胞，予重組人粒巨噬細(xì)胞集落刺激因子(GM-CSF)、鈣離子載體A23187聯(lián)合培養(yǎng)6天誘導(dǎo)分化為樹突狀細(xì)胞；分別用弱酸洗脫法提取單個(gè)核細(xì)胞MHC-I類抗原肽以及用0.4％K

2、Cl低滲法提取的白血病抗原，沖擊樹突狀細(xì)胞，形成負(fù)載抗原的AML-DC：抗原與樹突狀細(xì)胞共培養(yǎng)6天后與正常人外周血分離的、經(jīng)IL-2培養(yǎng)的T細(xì)胞共同培養(yǎng)，生成特異的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞；采用四甲基偶氮唑鹽比色法(MTT法)比較不同方法產(chǎn)生的CTL細(xì)胞對(duì)急性髓性白血病細(xì)胞的殺傷活性。用倒置顯微鏡觀察AML-DC誘導(dǎo)前后形態(tài)學(xué)變化，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)急性髓性白血病細(xì)胞誘導(dǎo)前后CD1α、CD83表型變化以及刺激T細(xì)胞后其CD152的表達(dá)。

3、 結(jié)果：白血病患者骨髓來源的單個(gè)核細(xì)胞經(jīng)過100ng/ml GM-CSF、500ng/ml鈣離子載體A23187成功誘導(dǎo)為樹突狀細(xì)胞，倒置顯微鏡下觀察具有典型的樹突狀細(xì)胞形態(tài)；其CD1α、CD83表達(dá)誘導(dǎo)前分別為1.16±0.15％、7.28±0.21％，CD83誘導(dǎo)后48h最高，達(dá)59.69±2.56％，較誘導(dǎo)前差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，以后逐漸降低，CD1α則在96h達(dá)最高，較誘導(dǎo)前明顯升高，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；弱酸洗脫法獲得的抗原肽沖擊樹突狀細(xì)