應(yīng)用神經(jīng)示蹤技術(shù)觀察先天性馬蹄內(nèi)翻足大鼠腓腸肌運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的變化.pdf

1、　　目的：本研究將胎兒外科、顯微外科和顯微注射技術(shù)相結(jié)合，并建立先天性馬蹄內(nèi)翻足大鼠動(dòng)物模型，應(yīng)用逆行性神經(jīng)示蹤的方法，研究CCF胎鼠后肢腓腸肌脊髓運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元的變化，為CCF的病因研究提供客觀依據(jù)?！　》椒ǎ簩?shí)驗(yàn)共采用雌性Wistar大鼠29只，按雌雄比例為4：1行午夜合籠，次日晨8時(shí)行陰道涂片，確定受孕情況隨機(jī)分為實(shí)驗(yàn)組(RA致畸組)15只和對(duì)照組14只。在孕10日，RA致畸組按120mg/kg體重稱取全反式維甲酸(at-RA)，按

2、40mg/ml于礦物油中混勻，經(jīng)灌胃器一次注入孕鼠胃內(nèi)。對(duì)照組于相同時(shí)間僅將與實(shí)驗(yàn)組同劑量但不含at-RA的礦物油經(jīng)灌胃器注入孕鼠胃內(nèi)。雌鼠孕20日行胎兒外科手術(shù)，用顯微注射的方法將5﹪的熒光金(FG)注射到正常胎鼠和先天性馬蹄內(nèi)翻足胎鼠后肢小腿腓腸肌中行逆行性神經(jīng)示蹤。術(shù)后孕鼠存活24小時(shí)取出胎鼠經(jīng)左心室穿刺注入0.9﹪氯化鈉灌洗，再注入4﹪多聚甲醛固定，顯微鏡下取出胎鼠腰骶段脊髓，行冰凍切片，在熒光顯微鏡下觀察脊髓內(nèi)FG標(biāo)記神經(jīng)元的