順序注射微流控焦磷酸測序系統(tǒng)的改進(jìn)及其應(yīng)用.pdf

1、DNA序列測定技術(shù)是現(xiàn)代生命科學(xué)研究的核心技術(shù)之一。與傳統(tǒng)Sanger法相比，焦磷酸測序技術(shù)是一種實(shí)時的DNA測序技術(shù)，具有快速、高效、成本低的特點(diǎn)?，F(xiàn)有的焦磷酸測序系統(tǒng)的發(fā)展主要有兩種趨向:一種是針對大規(guī)模測序的高通量系統(tǒng)，另一種是針對床邊檢測的便攜式的系統(tǒng)。本文在已有研究的基礎(chǔ)上對基于磁珠微反應(yīng)器的微流控焦磷酸測序系統(tǒng)進(jìn)行了改進(jìn)，并初步用于甲型流感病毒H1N1MP基因的分型和單核苷酸多態(tài)性檢測。
　　首先利用導(dǎo)磁片誘導(dǎo)永磁鐵加

2、磁的方法將表面固載化學(xué)反應(yīng)基團(tuán)的磁珠固定在毛細(xì)管內(nèi)形成流動微反應(yīng)器，通過周期性改變毛細(xì)管與導(dǎo)磁片之間的距離的方法使磁珠在反應(yīng)器中進(jìn)行強(qiáng)制攪拌運(yùn)動，使流動液固反應(yīng)的效率得到有效改進(jìn)。此流動微反應(yīng)器的制作方法簡單，不涉及任何微加工。通過改變磁場很容易進(jìn)行磁珠的固定、攪拌及更換操作，微反應(yīng)器可以實(shí)現(xiàn)重復(fù)利用，與順序注射相結(jié)合成為通用性好的微流控流動分析平臺。
　　其次，基于如上方法制作的流動微反應(yīng)器，以注射泵為動力，微弱化學(xué)發(fā)光儀做為檢

3、測器，結(jié)合縫管陣列方法順序引入試劑，建立了微型流動焦磷酸測序系統(tǒng)。通過向三酶系統(tǒng)的反應(yīng)液中加入apyrase的方法使背景信號大大降低。利用所建立的系統(tǒng)對反應(yīng)條件進(jìn)行了系統(tǒng)研究，成功測定了人工合成DNA單鏈的28個堿基序列，并用于甲型流感病毒H1N1 MP基因的序列測定和SNP位點(diǎn)的檢測，取得了與液相靜態(tài)焦磷酸測序方法一致的結(jié)果。
　　此微流控焦磷酸測序系統(tǒng)搭建及控制方法簡單、價格低廉、不需要微加工技術(shù)、易于實(shí)現(xiàn)自動化和便攜化，特別