proBDNF在脊髓損傷后對少突膠質(zhì)細胞前體細胞增殖及遷移的影響.pdf

1、[目的]
　　由少突膠質(zhì)細胞前體細胞(OPCs)參與的脊髓損傷(SCI)后軸突的再髓鞘化過程是一個內(nèi)源性的修復(fù)過程，其對挽救殘留軸突，促進后期功能恢復(fù)具有重要的作用。
　　神經(jīng)營養(yǎng)因子(NTs)作為一類重要的調(diào)控因子，對損傷后神經(jīng)的再生修復(fù)具有重要的調(diào)節(jié)作用。但近年來的研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)營養(yǎng)因子前體(proNTs)對神經(jīng)的損傷后修復(fù)具有廣泛的抑制作用。本課題組前期的研究發(fā)現(xiàn):腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子前體(pro-Brain-Deriv

2、ed Neurotrophic Factor，proBDNF)不僅直接抑制軸突的再生和延伸，而且抑制損傷后巨噬細胞介導(dǎo)的炎性浸潤反應(yīng)，特別是影響損傷局部有害物質(zhì)的清除，提示proBDNF對于損傷后修復(fù)的影響不僅僅限于神經(jīng)元本身。
　　基于上述原因，本實驗研究擬觀察腦源性神經(jīng)生長因子前體(proBDNF)對OPCs增殖分裂及遷移的影響。并進一步探討其與p75NTR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的關(guān)系。
　　[方法]
　　本研究分為體內(nèi)實驗

3、和體外實驗兩部分。
　　體內(nèi)實驗應(yīng)用proBDNF抗體治療SD大鼠T9脊髓損傷模型，觀察損傷后BBB評分的改善情況;應(yīng)用免疫熒光染色觀察p75及sortilin在OPCs上的表達以及損傷部位OPCs的分裂及遷移情況，評估proBDNF及其抗體對于OPCs生物學(xué)活性的影響;初步探討proBDNF作用與p75信號通路的關(guān)系。
　　體外實驗應(yīng)用小鼠少突膠質(zhì)細胞前體細胞系OLN-93作為研究對象，測定不同濃度梯度proBDNF對于O

4、LN-93細胞分裂增殖活性的影響;應(yīng)用細胞劃痕實驗觀察proBDNF對OLN-93細胞遷移活性的影響;應(yīng)用免疫熒光染色和western-blot方法觀察OLN093細胞表面p75、sortilin及內(nèi)源性proBDNF的表達;針對proBDNF和p75分子，觀察應(yīng)用不同阻斷劑治療后對OLN-93細胞活性的影響，討論proBDNF作用與p75NTR信號途徑的關(guān)系。
　　[結(jié)果]
　　內(nèi)源性的proBDNF抑制SCI后OPCs的

5、增殖分裂和遷移過程。BrdU染色表明proBDNF治療組的大鼠脊髓內(nèi)損傷區(qū)域處于分裂階段的OPCs細胞數(shù)量明顯減少。同時應(yīng)用proBDNF抗體對proBDNF進行特異性拮抗后OPCs的增殖活性顯著提高，功能恢復(fù)也明顯優(yōu)于對照組。
　　體外實驗亦發(fā)現(xiàn)proBDNF對OLN-93細胞的分裂增殖具有明顯的抑制作用，且這一作用具有濃度依賴性，其隨著proBDNF濃度的升高而增強。proBDNF抗體可以特異性拮抗proBDNF的作用，且不具

6、有明顯的濃度依賴。
　　OLN-93細胞的劃痕實驗證明了proBDNF抑制OPCs細胞的遷移而proBDNF抗體則對細胞的遷移具有促進作用。
　　體內(nèi)與體外實驗均證實OPCs細胞表達內(nèi)源性proBDNF及其受體p75NTR和sortilin。應(yīng)用可溶性重組蛋白p75NTRecd-FC及p75NTR特異性抗體的治療結(jié)果提示proBDNF通過p75NTR信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路介導(dǎo)對OPCs增殖和遷移的抑制作用。
　　[結(jié)論]