多重耐藥銅綠假單胞菌金屬β-內(nèi)酰胺酶基因檢測及對多粘菌素B耐藥機(jī)制研究.pdf

1、目的:了解2006年至2010年浙江省六家醫(yī)院銅綠假單胞菌對多粘菌素B及其他藥物的耐藥情況。檢測常見的金屬β－內(nèi)酰胺酶基因。體外誘導(dǎo)多粘菌素B對銅綠假單胞菌耐藥,初步研究其耐藥機(jī)制。
　　 方法:1.收集臨床分離的銅綠假單胞菌,采用瓊脂稀釋法和E-test法進(jìn)行藥物敏感性試驗。2.PCR擴(kuò)增常見的金屬β-內(nèi)酰胺酶基因。3.對多重耐藥的銅綠假單胞菌進(jìn)行體外誘導(dǎo),獲得多粘菌素B耐藥菌株。4.對臨床分離株和誘導(dǎo)耐藥株的二組分系統(tǒng)Pmr

2、AB和PhoPQ的編碼基因進(jìn)行PCR擴(kuò)增并測序分析。
　　 結(jié)果:1.437株銅綠假單胞菌對9種臨床常用抗生素的耐藥率很高,對美羅培南、環(huán)丙沙星和頭孢哌酮/舒巴坦的耐藥率均大于30.0％,但對多粘菌素B的敏感率為93.4％。2.檢測169株細(xì)菌金屬β內(nèi)酰胺酶基因,其中IMP-4基因陽性1株,未檢測到VIM基因。3.對6株銅綠假單胞菌進(jìn)行體外誘導(dǎo)試驗,獲得3株多粘菌素B耐藥菌株。多粘菌素B對3株耐藥菌株的MIC值從1,1和1μg/

3、ml上升到128,128和64μg/ml,但對其他抗生素的MIC值均未發(fā)生改變。4.對臨床分離株與誘導(dǎo)耐藥株的二組分系統(tǒng)pmrAB和phoPQ基因擴(kuò)增和測序表明,B919號臨床分離株與誘導(dǎo)耐藥株相比,pmrB基因有兩個堿基突變,分別為G突變?yōu)锳,T突變?yōu)镃;phoQ基因有一個堿基突變,A突變?yōu)門,并且有一段152 bp的DNA片段缺失。
　　 結(jié)論:1.大部分銅綠假單胞菌表現(xiàn)為多重耐藥,未發(fā)現(xiàn)多粘菌素B耐藥菌株。