尼美舒利聯(lián)合奧沙利鉑對人肺癌裸鼠移植瘤的治療作用及其作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:目前由于吸煙及環(huán)境等多種因素的影響，肺癌的發(fā)病率仍很高。盡管存在多種治療手段，其總的5年無瘤生存率仍無明顯改觀。肺癌已是全球死亡的首要原因。每年大約有百萬人，包括85萬名男性和33萬名女性死于肺癌。根據(jù)組織學(xué)分類，它有兩個主要亞型，即小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌，后者占所有肺癌病例的85％，超過60％非小細(xì)胞肺癌患者在診斷時已是晚期或存在轉(zhuǎn)移，并且已無手術(shù)機(jī)會。近來，對于肺癌的分子靶向治療成為研究的熱點(diǎn)。多種基因參與著肺癌的侵襲和轉(zhuǎn)移

2、。其中生存素(survivin)是凋亡抑制蛋白家族(InhibitorOfApoptosisProtein，IPA)家族中的重要成員，是一種抗凋亡蛋白，在許多腫瘤及癌前病變中都有過度表達(dá)。抑制survivin的表達(dá)，可以抑制腫瘤細(xì)胞增殖及誘導(dǎo)凋亡?；|(zhì)金屬蛋白酶-2(matrixmetalloproteinases-2)為蛋白水解酶家族的一員，能夠降解Ⅳ型膠原和主要的基底膜組成部分，在腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移的發(fā)展中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。CD44v6

3、是粘附分子家族中的一員，介導(dǎo)細(xì)胞與細(xì)胞、細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)間黏附作用的膜表面糖蛋白，在人類惡性腫瘤中普遍表達(dá)。Ki67是一種細(xì)胞增殖相關(guān)的核抗原，其表達(dá)陽性表明癌細(xì)胞增殖活躍。尼美舒利(nimesulide)是常用的非甾體類抗炎藥，為選擇性環(huán)氧化酶-2(COX-2)抑制劑，研究證實(shí)，尼美舒利有抑制腫瘤生長的作用。奧沙利鉑(oxaliplatin)為常用的第三代鉑類抗癌藥物。本研究經(jīng)建立人肺癌裸鼠移植瘤模型，并研究非甾體類抗炎藥尼美舒利聯(lián)合

4、常用的化療藥物奧沙利鉑，對于人肺癌裸鼠移植瘤的抑瘤作用及對survivin、MMP-2、CD44v6和ki67分子表達(dá)的影響，并探討其作用機(jī)制，致力于探索治療肺癌的新的有效藥物。
　　 方法:選取4～5周齡BALB/c雄性裸小鼠25只，在特定條件下飼養(yǎng)。取處于對數(shù)生長期的人肺癌A549細(xì)胞接種于裸鼠左側(cè)腋部皮下。從而建立人肺癌裸鼠移植瘤模型。當(dāng)移植瘤生長直徑達(dá)4mm時，除去腫瘤結(jié)節(jié)體積最小的一只裸鼠。將裸鼠隨機(jī)分組為尼美舒利組、

5、奧沙利鉑組、尼美舒利聯(lián)合奧沙利鉑組及對照組。奧沙利鉑組裸鼠給予腹腔注射奧沙利鉑甘露醇注射液10mg/kg/次，隔三天給藥1次，同時口服滅菌的蒸餾水;尼美舒利組裸鼠給予尼美舒利20mg/kg/d灌胃，同時腹腔注射同等量生理鹽水;尼美舒利聯(lián)合奧沙利鉑組給予尼美舒利灌胃和奧沙利鉑腹腔注射，用量與兩藥單一用藥組相同;對照組口服滅菌蒸餾水，腹腔注射等量生理鹽水。給藥30天后，處死動物，留取腫瘤組織。免疫組織化學(xué)法檢測腫瘤組織中survivin，M

6、MP-2，CD44v6，ki67蛋白的表達(dá)，用北航真彩色病理圖像分析系統(tǒng)計(jì)算平均積分光密度值。實(shí)時熒光定量PCR法檢測瘤組織中survivin，MMP-2，CD44v6，ki67mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)果:以病理圖像分析系統(tǒng)測定survivin，MMP-2，CD44v6，ki67蛋白免疫組織化學(xué)染色切片積分光密度值，統(tǒng)計(jì)分析顯示，與對照組比較，尼美舒利組及尼美舒利/奧沙利鉑聯(lián)合用藥組suruivin，MMP-2，CD44v6，

7、ki67蛋白表達(dá)水平均明顯降低（分別P＜0.05）;與對照組比較，奧沙利鉑組survivin和ki67蛋白表達(dá)水平降低（分別P＜0.05）;與對照組比較，奧沙利鉑組MMP-2和CD44v6蛋白表達(dá)水平無差異（分別P＞0.05）;與其它各組比較，尼美舒利/奧沙利鉑聯(lián)合用藥組survivin，MMP-2，CD44v6，ki67蛋白表達(dá)水平均明顯降低(分別P＜0.05)。
　　 熒光實(shí)時定量PCR法測定survivin，MMP-2，C

8、D44v6，ki67mRNA的表達(dá)，分析結(jié)果顯示，與對照組比較，尼美舒利組及尼美舒利/奧沙利鉑聯(lián)合用藥組survivin，MMP-2，CD44v6和ki67mRNA表達(dá)水平均明顯降低（分別P＜0.05）;與對照組比較，奧沙利鉑組survivin和ki67mRNA表達(dá)水平降低（分別P＜0.05）;與對照組比較，奧沙利鉑組MMP-2和CD44v6mRNA表達(dá)水平無差異（分別P＞0.05）;與其它各組比較，尼美舒利/奧沙利鉑聯(lián)合用藥組surv