RNA干擾Survivin及neu基因?qū)β殉舶┘?xì)胞株SKOV3-DDP細(xì)胞生長、凋亡及藥物敏感性的作用.pdf

1、　　目的：RNA干擾(RNAi)是由雙鏈RNA介導(dǎo)的、在mRNA水平特異關(guān)閉相應(yīng)基因的基因阻斷新技術(shù)，在基因功能的研究方面已經(jīng)展現(xiàn)顯著功效，對于基因治療亦具有極大的應(yīng)用前景。Survivin及neu基因與卵巢癌細(xì)胞的生長、凋亡及耐藥性相關(guān)。本研究旨在探討Survivin及HER-2/neuRNAi對卵巢癌耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP細(xì)胞生長、凋亡及藥物敏感性的作用，尋找下調(diào)基因表達(dá)并逆轉(zhuǎn)化療耐藥的方法，為卵巢癌的基因治療探索新途徑。

2、 方法：應(yīng)用含有U6啟動子的pSilencer1.0-U6表達(dá)載體構(gòu)建Survivin及neu基因的小干擾RNA(siRNA)表達(dá)載體(pSilencer-Survivin和pSilencerneu)，用脂質(zhì)體方法將pSilencer-Survivin或pSilencer-neu轉(zhuǎn)染卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP，另設(shè)未轉(zhuǎn)染組及轉(zhuǎn)染pSilencer-control組為對照。顯微鏡下觀察轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的變化；用RT-PCR及W

3、esternBlot檢測Survivin及neu基因mRNA及蛋白的表達(dá)；MTT法檢測細(xì)胞生長情況；流式細(xì)胞儀檢測細(xì)胞凋亡及周期的變化；加入順鉑后檢測RNAi對SKOV3/DDP順鉑藥物敏感性的影響?！　〗Y(jié)論：應(yīng)用RNAi可以部分阻抑Survivin及HER-2/neu基因在卵巢癌順鉑耐藥細(xì)胞株SKOV3/DDP中的表達(dá)，使SKOV3/DDP細(xì)胞生長減慢、凋亡增加，而且對順鉑的敏感性增強(qiáng)。RNAi技術(shù)有望成為腫瘤基因治療的一種新方法。