非小細胞肺癌生物標志物的定量蛋白質(zhì)組學研究.pdf

1、肺癌是目前最常見的惡性腫瘤之一，對人類健康的危害日益嚴重。目前，80％的肺癌患者就診時己屬晚期，失去了手術(shù)根治的機會，放療化療效果不佳，5年生存率低；而早期肺癌手術(shù)后5年生存率雖然較高，但肺癌發(fā)病隱匿，早期確診率低，故肺癌總的預后不良，與肺癌缺乏有效的早期診斷手段有關(guān)。臨床上急需建立快速、簡便、易于為患者接受、且準確可靠的肺癌無創(chuàng)診斷新方式。尋找敏感性，特異性高的早期診斷方法是目前臨床亟待解決的問題。
　　 與此同時，目前臨床應(yīng)

2、用的病理分期模式，并不能有效評估可手術(shù)的非小細胞肺癌患者接受手術(shù)治療后疾病進展情況，特別是臨床上常可觀察到某一特定亞組的患者，術(shù)后在較短時間內(nèi)出現(xiàn)復發(fā)或轉(zhuǎn)移，影響患者預后，而用傳統(tǒng)的理論及檢測手段尚無法作出合理的解釋，因此也為患者術(shù)后制定個體化的治療方案帶來困難。
　　 生物標志物是生理及病理狀態(tài)下可度量的生物指標，可用于表征疾病危險程度，疾病的發(fā)生與發(fā)展；生物質(zhì)譜技術(shù)作為目前定量蛋白質(zhì)組學的核心技術(shù)，對癌癥生物標志物的研究具有

3、極大的推動作用，為解答上述臨床疑問，滿足上述臨床需求帶來了希望的曙光。
　　 在第一部分的研究中，我們采用肺癌細胞株(A549)細胞內(nèi)蛋白質(zhì)組作為定量對照，對癌細胞的各種分泌蛋白質(zhì)進行質(zhì)量控制與評測，結(jié)果顯示該創(chuàng)新性研究策略可有效降低細胞內(nèi)蛋白質(zhì)對分泌蛋白質(zhì)組的污染，從而篩選出高質(zhì)量、癌細胞特異性的分泌蛋白質(zhì)組。我們進一步篩選并驗證了Plasminogen activatorInhibitor1(PAI-1)與C4b-bindi

4、ng protein(C4BP)這兩種蛋白質(zhì)在非小細胞肺癌患者與正常人血清中的表達差異。結(jié)果顯示該研究策略有助于發(fā)現(xiàn)由癌細胞分泌產(chǎn)生的肺癌候選生物標志物。
　　 在第二部分的研究中，我們以靶向定量的質(zhì)譜技術(shù)研究肺癌血清生物標志物，在探索階段，通過隨訪得到肺癌患者接受根治性手術(shù)治療后疾病進展及生存數(shù)據(jù)，根據(jù)預后的異質(zhì)性進行患者亞群分類，并根據(jù)性別、年齡、吸煙史、病理分期等因素進行配對研究，使用鳥槍法非標記定量技術(shù)，篩選出預后相關(guān)差

5、異表達蛋白質(zhì)。在驗證階段，采用多重反應(yīng)檢測技術(shù)(nultiple reaction monitoring，MRM)以及酶聯(lián)免疫吸附法(Enzyme-Linked Immunosorbent Assay，ELISA)分別對肺癌患者血清中的靶蛋白質(zhì)進行絕對定量研究。結(jié)果顯示：SAA(Serumamyloid A protein)、LRG1(Lericine-rich alpha-2-glycoprotein)與C4BP這三種血清蛋白質(zhì)可作為