SCA3-MJD患者外周血ATXN3基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化水平的研究.pdf

1、目的:
　　研究脊髓小腦性共濟(jì)失調(diào)3型/馬查多-約瑟夫病(spinocerebellarataxia type3/Machado-Joseph disease，SCA3/MJD)患者外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheral blood mononuclear cells，PBMCs)中ATXN基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化水平，研究ATXN3基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化水平與CAG重復(fù)序列拷貝數(shù)、SCA3/MJD發(fā)病年齡及ATXN3基因mRN

2、A表達(dá)水平之間的相關(guān)性。
　　方法:
　　共收集71個(gè)SCA3/MJD家系的141例患者作為本研究的病例組和112例健康個(gè)體作為對(duì)照組。采用密度梯度離心分離SCA3/MJD患者和正常人的PBMCs;采用重亞硫酸鹽測(cè)序法(bisulfite genomicsequencing PCR，BSP)檢測(cè)ATXN3基因啟動(dòng)子區(qū)2個(gè)CpG島的DNA甲基化水平;采用T載體克隆測(cè)序檢測(cè)SCA3/MJD患者ATXN3基因的CAG重復(fù)序列拷貝數(shù)

3、;采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR(real-timequantitative PCR，qRT-PCR)方法檢測(cè)ATXN3 mRNA的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　1.通過BSP技術(shù)驗(yàn)證了ATXN3基因啟動(dòng)子區(qū)2個(gè)CpG島的甲基化水平，CpG島1（距離轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)較遠(yuǎn)）呈高甲基化水平，CpG島2（距離轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)較近）呈低甲基化水平。
　　2.SCA3/MJD病例組ATXN3基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島1的甲基化水平較對(duì)照組明顯(82.6

4、1±3.97 vs78.97±2.22，p=0.00);所收集的71個(gè)SCA3/MJD家系中，有7個(gè)家系的同一親代有多個(gè)子代，且子代的CAG重復(fù)序列拷貝數(shù)相同，其中6個(gè)家系中發(fā)病年齡早的患者較發(fā)病年齡晚的甲基化水平偏高。
　　3.SCA3/MJD病例組中，有CAG重復(fù)序列動(dòng)態(tài)突變家系中的親代較未出現(xiàn)動(dòng)態(tài)突變家系親代，ATXN3基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化水平偏高(86.04±2.68 vs80.04±2.8, p=0.00)。

5、　　4.SCA3/MJD病例組與對(duì)照組的ATXN3基因mRNA水平無明顯差異(0.51±0.25 vs0.46±0.19，p=0.27)，mRNA水平與ATXN3基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化水平無相關(guān)性。
　　結(jié)論:
　　1.首次利用BSP技術(shù)驗(yàn)證了ATXN3基因啟動(dòng)子區(qū)2個(gè)CpG島的甲基化水平，島1呈高甲基化水平，島2呈低甲基化水平。
　　2.ATXN3基因啟動(dòng)子區(qū)DNA甲基化水平與SCA3/MJD患者的遺傳早現(xiàn)有關(guān)。<