蘭州地區(qū)手足癬甲真菌病的病原學(xué)研究.pdf

1、手癬(tinea manuum)、足癬 (tinea pedis) 及是指累及手掌和指間、足跖和趾間的皮膚癬菌感染，甲真菌病(onychomycosis)是指由任何真菌所致的甲感染，是一類常見的真菌感染性疾病。具有傳染性，發(fā)病率高，容易復(fù)發(fā)和再感染，雖不危及生命，但對(duì)患者的生活質(zhì)量造成不同程度的影響。手足癬甲真菌病的主要致病菌為紅色毛癬菌，其病原菌菌種構(gòu)成及分布存在地區(qū)差異；而且隨著人口流動(dòng)、環(huán)境因素變化及治療干預(yù)等，同一地區(qū)的菌種也會(huì)

2、發(fā)生變遷。尚缺乏蘭州地區(qū)手足癬甲真菌病的發(fā)病情況及病原學(xué)流行病學(xué)的詳細(xì)資料。 目的：1．了解蘭州地區(qū)手足癬甲真菌病發(fā)病情況及病原菌菌種分布特點(diǎn)，為手足癬甲真菌病的流行病學(xué)研究奠定基礎(chǔ)，同時(shí)為臨床抗真菌藥物的合理應(yīng)用提供理論依據(jù)。2．探討PCR結(jié)合RFLP的分子生物學(xué)技術(shù)鑒定皮膚癬菌的特異性和敏感性，以便在手足癬甲真菌病病原真菌的鑒定中推廣應(yīng)用。 方法：2006年1月～2006年12月，對(duì)蘭州大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科門診擬診為手

3、足癬甲真菌病的患者，分別取其皮屑和/或甲屑做15﹪KOH直接涂片鏡檢。采用調(diào)查問卷的方式，詳細(xì)登記鏡檢陽性患者的相關(guān)臨床資料。對(duì)陽性標(biāo)本行沙堡葡萄糖瓊脂分離培養(yǎng)、鑒定菌種。采用真菌通用引物ITS1、ITS4對(duì)手足癬甲真菌病的優(yōu)勢(shì)致病菌rDNA的ITS區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從分子水平鑒定到紅色毛癬菌菌種的水平，經(jīng)鑒定的紅色毛癬菌進(jìn)一步對(duì)其可變區(qū) NTS(norltranscribedspacer)區(qū)兩個(gè)串聯(lián)重復(fù)單元TRS (tandemly

4、repetitive subelements)即TRS-1、TRS-2區(qū)片段進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，顯示同種不同株紅色毛癬菌基因型可能的差異。對(duì)基因組DNA采用限制性片段長度多態(tài)性 (RFLP) 分析，用Hinf I和Taq I兩種限制性內(nèi)切酶對(duì)ITS1、ITS4的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切。 結(jié)果：1．262例真菌鏡檢陽性的手足癬甲真菌病患者，甲真菌病153例(58.40﹪)，足癬150例(57.25﹪)，手癬37例(14.12﹪)。鏡檢可見

5、菌絲和/或孢子，以菌絲為主。分離菌株135株(陽性率51.53﹪)，其中紅色毛癬菌107株(占培養(yǎng)結(jié)果的79.26﹪)，白念珠菌17株(占12.59﹪)，犬小孢子菌9株(占6.67﹪)，紅酵母屬及鏈格孢霉屬各1株(各占0.74﹪)。2．引物ITS1、ITS4在紅色毛癬菌均擴(kuò)增出一約690bp特異性條帶；3．TRS-1區(qū)TrNTSF-2和TrNTSR-4引物把72株紅色毛癬菌共分為3型，呈現(xiàn)明顯的種內(nèi)多態(tài)性，在29例受試患者中，6例不同感

6、染部位分離得到的菌株基因型有差異；TRS－2區(qū)TrNTSC－1和YrNTSR-1引物擴(kuò)增出一約500bp特異性條帶。4．Hinf I、Taq I的酶切片段完全相同。 結(jié)論：1．蘭州地區(qū)手足癬甲真菌病的致病菌種比較單一，優(yōu)勢(shì)致病菌為紅色毛癬菌：2．引物ITSl、ITS4可以把紅色毛癬菌特異地鑒定到種的水平，從而使臨床快速鑒定該菌成為可能；3．TRS－1區(qū)TrNTSF-2和TrNTSR-4引物可以對(duì)紅色毛癬菌進(jìn)行種內(nèi)分型，而TRS－