人血清章魚胺含量測定方法的研究與天然章魚胺補充劑的開發(fā).pdf

1、章魚胺是一種重要的生物胺，作為內(nèi)源性的神經(jīng)介質(zhì)與β3-腎上腺素能受體激動劑，章魚胺在能量的平衡與能量代謝的調(diào)節(jié)上有重要的作用，但其生物學意義與生理學作用尚未被充分認識。人體各種器官特別是肝臟中的細胞色素P450酶系單加氧酶是體內(nèi)生物合成章魚胺的限速酶，有關(guān)糖尿病、肝病對細胞色素P450酶系單加氧酶活性的影響已有詳盡討論。章魚胺在人體內(nèi)也可以因單胺氧化酶作用而被降解，而單胺氧化酶活性過強與抑郁癥等精神疾患有關(guān)。因此，人血清章魚胺含量有可能

2、作為一項血液臨床生化檢驗項目，在病理學和藥理學的研究中有潛在的價值。
　　 本論文分為兩個部分，第一部分建立了人血清中腎上腺素能受體激動劑章魚胺檢測方法，為準確快速測定人血清中章魚胺含量研究提供可靠的分析手段。第二部分是天然章魚胺補充劑的開發(fā)，主要是水產(chǎn)品可食部章魚胺含量的研究，以及通過營養(yǎng)性小鼠的減肥試驗研究章魚胺對小鼠的減肥降脂作用。
　　 本論文目的之一是建立人血清中腎上腺素能受體激動劑章魚胺檢測方法，據(jù)大多文獻介

3、紹，章魚胺的HPLC分析多為衍生化方法，但衍生化方法實驗操作過程繁瑣，且成本高。本試驗想建立一種快速不需要衍生處理的HPLC檢測方法，先將人血清用流動相稀釋5倍，經(jīng)微孔濾膜(0.45μm)濾過；在色譜條件的選擇中，我們用色譜柱：phenomenex luna C18(150×4.60mm，5μm)，流動相：0.02mol·L-l檸檬酸-0.02mol·L-1磷酸二氫鈉(7∶3)，pH調(diào)為3，流速：0.8mL·min-l，紫外檢測波長：2

4、20nm，進樣體積：20μL。實驗結(jié)果表明，此方法章魚胺在0.006～50μg·mL-1范圍內(nèi)，濃度與峰面積線性關(guān)系良好(r=0.9999)，平均加樣回收率為104.4％，RSD為1.53％。最低檢出濃度為6.0ng·mL-1。此HPLC檢測方法不需要衍生處理，樣品用量少，可直接上機測定，具有良好的專一性，精密度和回收實驗結(jié)果表明，測定結(jié)果穩(wěn)定，具有微量、簡便、快捷、靈敏等特點，能符合測定的要求。
　　 為證明上述方法的可靠性，

5、我們使用了HPLC柱前衍生方法與其進行比較，通過使用HPLC柱前衍生方法測定人血清中章魚胺的含量。方法是先用高氯酸溶液提取，并用丹酰氯衍生；色譜條件的選擇中，我們用ODS反相柱，柱溫40℃，檢測波長為254nm，用0.1mol/L醋酸銨和乙腈做流動相，梯度洗脫，流速為1.0ml/ml。章魚胺標準品用流動相稀釋成0.001～20mg/L的梯度溶液，按照色譜條件檢測，以峰面積為縱坐標，濃度為橫坐標繪制標準曲線。經(jīng)回歸分析，章魚胺在0.001

6、～20mg/L范圍內(nèi)有良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)大于0.999。最低檢測限為6.0ng·mL-1。加低、中、高濃度標準品的回收率是90.0～110.0％。本實驗方法靈敏、可靠，適合臨床診斷以及藥物研發(fā)中分析多種生物胺含量的研究。測出健康成年人血清章魚胺的含量是成年人為4.87±1.70μg·mL-1。與之前不用衍生的方法測出的結(jié)果健康成年人血清章魚胺含量為4.50±1.10μg·mL-1幾乎吻合。
　　 本論文目的之二是對天然章魚

7、胺的開發(fā)，首先是對水產(chǎn)品可食部章魚胺含量的研究，我們測定了各種淡水和海水水產(chǎn)品可食部中β3-腎上腺素能受體激動劑章魚胺的含量，為水產(chǎn)品中章魚胺的開發(fā)利用提供依據(jù)。取魚、甲殼類、頭足類可食部位勻漿后超聲處理，用HPLC測定離心后上清液的章魚胺含量。結(jié)果表明8種淡水魚肉章魚胺含量在30～130μg·g-1之間，其中，背肉普遍比腹肉中含量高。海水魚以及淡水甲殼類的章魚胺含量與淡水魚大致相似。海水甲殼類中章魚胺含量特別高，是淡水、海水魚和淡水甲

8、殼類的幾十倍，甚至千百倍。頭足類的章魚胺含量也比較高，在海洋藻類中未檢測出章魚胺。海洋貝類等是水產(chǎn)品中章魚胺最豐富的來源，是減肥者與糖尿病人的理想食物。
　　 其次我們研究了章魚胺對營養(yǎng)性肥胖小鼠的減肥作用。首先采用高脂飼料建立小鼠肥胖模型，以小鼠體重、Lee's指數(shù)、脂肪濕重、脂肪系數(shù)、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)及高密度脂蛋白(HDL-C)等指標的變化，研究章魚胺對小鼠的減肥作用。4周以后，肥胖對照組小鼠較普通對照

9、組小鼠體重、脂肪濕重、脂肪系數(shù)、血清總膽固醇(TC)、甘油三酯(TG)及高密度脂蛋白(HDL-C)含量均顯著增加(P＜0.05)，表明營養(yǎng)肥胖模型構(gòu)建成功。建模成功后，對章魚胺高、中、低3個劑量組分別以60、30、15mg/kg-d劑量的章魚胺灌胃，陽性藥對照組給予8mg/kg·d的祛脂瘦身膠囊，模型對照組及正常對照組給以等體積溶媒。灌胃4周后，本試驗發(fā)現(xiàn)，章魚胺各劑量組及陽性對照組中小鼠體重、脂肪濕重、脂肪系數(shù)、血清總膽固醇(TC)與