負載Photosan的氧化鈦納米顆粒介導胰腺癌光動力治療的體內外研究.pdf

1、第一部分負載Photosan的氧化鈦納米顆粒對體外培養(yǎng)人胰腺癌細胞Panc-1的光動力滅活作用
　　目的：
　　探求Photosan和中空二氧化鈦納米顆粒裝載的Photosan(簡稱Nano-Photosan)介導的光動力治療（Photodynamic Therapy，PDT）對體外培養(yǎng)人胰腺癌細胞Panc-1的療效。探索Photosan和負載Photosan的氧化鈦納米顆粒的殺傷效果及最佳滅活參數(shù)。
　　方法：

2、>　　1.MTT比色分析法測定Photosan及Nano-Photosan對正常胰腺細胞系H6C7及胰腺癌細胞系Panc-1的作用。
　　2.AnnexinⅤ-FITC/PI雙染標記法檢測Photosan及Nano-Photosan導致的H6C7和細胞Panc-1凋亡與壞死。
　　結果：
　　1.MTT比色分析法結果顯示:僅使用光照或僅用光敏劑孵育均不影響正常胰腺細胞H6C7、胰腺癌細胞Panc-1的存活;兩種光敏劑的

3、光動力滅活在一定范圍內與光敏劑的濃度、孵育時間及單位面積光照劑量呈正相關;相同參數(shù)設定下的Nano-Photosan較Photosan對細胞Panc-1具有更強殺傷作用;各自最佳應用參數(shù)中，Photosan介導的PDT治療后4小時出現(xiàn)細胞Panc-1生長狀況欠佳;Nano-Photosan介導PDT治療后2小時出現(xiàn)細胞Panc-1生長狀況欠佳;Nano-Photosan比Photosan對細胞Panc-1的生長抑制效應起效更快;兩種光敏

4、劑介導的PDT（使用最適參數(shù)）對正常胰腺H6C7細胞均未發(fā)現(xiàn)有明顯殺傷抑制作用。
　　2.AnnexinⅤ-FITC/PI雙染標記法檢測顯示，Photosan介導PDT和Nano-Photosan介導PDT對細胞Panc-1的滅活效應均以誘導細胞凋亡為主;在應用各自最適參數(shù)處理后，Nano-Photosan介導PDT較Photosan介導PDT引起的細胞Panc-1整體凋亡壞死率高(P＜0.05)。
　　結論：
　　1

5、.Photosan及Nano-Photosan均需要配合一定頻率的光波照射后方可通過細胞凋亡、壞死介導光動力滅活作用。
　　2.Nano-Photosan介導PDT比Photosan介導PDT對細胞Panc-1系具有更快速、更強力、更高效的滅活效應。兩種光敏劑介導的PDT治療對正常胰腺細胞可能無毒副作用。
　　3.Photosan介導PDT和Nano-Photosan介導PDT對細胞Panc-1株的殺傷作用主要通過誘導細胞凋

6、亡來實現(xiàn)。
　　關鍵詞:光動力療法;納米光敏劑;中空氧化鈦納米顆粒;胰腺癌;Panc-1細胞
　　第二部分在體評估Nano-Photosan介導PDT對胰腺癌的滅活作用
　　目的
　　構建裸鼠人胰腺癌細胞Panc-1模型，評估Photosan及Nano-Photosan介導的光動力治療對在體腫瘤生長的抑制效應。
　　方法
　　1.構建裸鼠人胰腺癌細胞Panc-1移植瘤模型。
　　2.觀察并比較P

7、hotosan及Nano-Photosan對裸鼠人胰腺癌移植瘤的治療效果及副反應。
　　結果
　　1.人胰腺癌細胞Panc-1裸鼠移植成功率為100％，腫瘤平均體積達0.2cm3左右耗時7±2天。
　　2.從PDT治療后2天起，Photosan介導PDT治療組及Nano-Photosan介導PDT治療組與對照組腫瘤體積比較存在統(tǒng)計學差異(P＜0.05)，而Photosan組與Nano-Photosan組比較從PDT治療

8、后第6天開始表現(xiàn)出統(tǒng)計學差異(P＜0.05)。PDT治療組裸鼠移植瘤的重量及體積明顯較對照組為低，且Nano-Photosan組顯著小于Photosan組(P＜0.05)。
　　3.PDT治療后14天處死鼠腫塊HE染色鏡下觀察，Nano-Photosan組凋亡及壞死程度明顯高于Photosan組，Photosan組鼠癌細胞并未完全滅活，而Nano-Photosan組未見明顯存活癌細胞。
　　4.Photosan及Nano-P

9、hotosan給藥后裸鼠未發(fā)現(xiàn)明顯副作用及不良反應。
　　結論
　　1.Photosan及Nano-Photosan均對人胰腺癌荷瘤裸鼠模型中腫瘤都具有治療效果，后者對胰腺癌的滅瘤效應明顯優(yōu)于前者，且耗時短。
　　2.Photosan及Nano-Photosan介導的PDT對正常組織可能是安全的。
　　關鍵詞:二氧化鈦納米顆粒;光敏劑;光動力療法;胰腺癌;胰腺癌裸鼠移植瘤
　　第三部分負載Photosan的

10、氧化鈦納米顆粒介導的PDT對人胰腺癌細胞Panc-1的作用及機制研究
　　目的
　　研究Nano-Photosan在PDT中對胰腺癌細胞Panc-1的光動力滅活作用對細胞周期及自噬的影響并探討其機制。
　　方法
　　1.根據(jù)第一、二部分測定的光動力最佳治療參數(shù)處理Panc-1細胞。PI單染結合流式細胞儀檢測Photosan及Nano-Photosan分別介導PDT后Panc-1細胞的周期分布。
　　2.實時

11、定量基因擴增熒光檢測系統(tǒng)(Real-time Quantitative PCRDetecting System，RT-qPCR)檢測TGF-β1 mRNA表達變化;Western-blotting蛋白免疫印跡法檢測TGF-β1，LC3B及Beclin1基因的蛋白表達差異。
　　3.透射電鏡技術檢測Photosan及Nano-Photosan分別介導PDT后Panc-1細胞中的自噬現(xiàn)象。
　　結果
　　1.Nano-Ph

12、otosan介導PDT作用后，細胞Panc-1周期被阻滯于G1期。
　　2.相對于Photosan組，Nano-Photosan介導的PDT治療后TGF-β1含量顯著升高，而LC3B及Beclin1蛋白表達水平卻在治療后10小時內明顯降低。
　　3.兩組光敏劑分別介導PDT后在在透射電鏡下發(fā)現(xiàn)兩者具有自噬小體和自噬小泡形成，但Nano-Photosan組自噬小體及自噬小泡數(shù)目顯著小于Photosan組自噬小體及自噬小泡的量。

13、
　　結論
　　1.Nano-Photosan介導的PDT作用后，細胞Panc-1的細胞周期被停滯于G1期。
　　2.PDT能夠誘導胰腺癌細胞Panc-1TGF-β1的表達水平升高從而抑制細胞增殖并使其趨向自噬，Nano-Photosan-PDT治療介入此環(huán)節(jié)并扭轉了TGF-β1對LC3B及Beclin1的上調趨勢。
　　3.經(jīng)Nano-Photosan介導的PDT處理后Panc-1細胞后的自噬水平較Photos